| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 一、引言 | 第9-15页 |
| 1. 鸭肝炎概述 | 第9-10页 |
| 2. DHAV的分子生物学特征 | 第10-11页 |
| 3. 小RNA病毒VP3基因及VP3蛋白的研究进展 | 第11-14页 |
| ·VP3基因序列的特点 | 第11页 |
| ·VP3蛋白的特点与功能 | 第11-13页 |
| ·与病毒RNA释放有关 | 第12页 |
| ·与细胞受体的作用 | 第12页 |
| ·诱导体液免疫 | 第12页 |
| ·诱导T细胞免疫 | 第12-13页 |
| ·与细胞凋亡的关系 | 第13页 |
| ·对病毒粒子理化性质的影响 | 第13页 |
| ·VP3与2CA~(ATPase)的相互作用 | 第13页 |
| ·总结与展望 | 第13-14页 |
| 4. 选题目的及意义 | 第14-15页 |
| 二、试验研究 | 第15-48页 |
| 1. 实验材料 | 第15-17页 |
| ·毒株、菌株、载体和血清 | 第15页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第15页 |
| ·主要试剂的配制 | 第15-17页 |
| ·RNA提取、目的基因克隆所需试剂 | 第16页 |
| ·蛋白表达、检测所需主要试剂 | 第16页 |
| ·Western blot试剂的配制 | 第16-17页 |
| ·制备多克隆抗体和间接ELISA所需试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| 2. 方法 | 第17-27页 |
| ·DHAV-1 VP3的原核表达、纯化及鉴定 | 第17-23页 |
| ·VP3基因引物 | 第17页 |
| ·病毒的增殖 | 第17-18页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第18页 |
| ·VP3基因的PCR扩增 | 第18页 |
| ·VP3基因的克隆 | 第18-20页 |
| ·VP3基因及VP3蛋白的生物信息学分析 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的表达与鉴定 | 第21-23页 |
| ·重组蛋白的抗血清中和活性检测及B细胞抗原表位鉴定 | 第23-25页 |
| ·多抗血清的制备 | 第23页 |
| ·多抗血清琼扩效价的测定 | 第23页 |
| ·多抗血清的Westem blot分析 | 第23页 |
| ·多抗血清中和活性的检测 | 第23-24页 |
| ·B细胞抗原表位的鉴定 | 第24-25页 |
| ·B细胞表位抗体检测能力的初步评估 | 第25页 |
| ·基于VP3蛋白的间接ELISA方法的建立 | 第25-27页 |
| ·间接ELISA条件的优化 | 第25-26页 |
| ·间接ELISA方法的评价 | 第26-27页 |
| ·VP3 Ⅰ-ELISA和DHAV-1 Ⅰ-ELISA之间符合率的评估 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-43页 |
| ·DHAV-1 VP3的原核表达、纯化及鉴定 | 第27-35页 |
| ·VP3的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·VP3基因重组载体的构建与鉴定 | 第28页 |
| ·VP3基因及VP3蛋白的生物信息学分析 | 第28-33页 |
| ·重组VP3蛋白的表达与鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白的抗血清中和活性检测及B细胞抗原表位鉴定 | 第35-39页 |
| ·重组蛋白多抗效价的测定 | 第35页 |
| ·重组蛋白多抗的Western blot分析 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白多抗的中和活性检测 | 第36-37页 |
| ·VP3的B细胞表位鉴定 | 第37-38页 |
| ·B细胞表位抗体检测能力的初步评估 | 第38-39页 |
| ·基于VP3蛋白的间接ELISA方法的建立 | 第39-43页 |
| ·条件的优化 | 第39-40页 |
| ·临界值的确定 | 第40-41页 |
| ·敏感性试验 | 第41页 |
| ·特异性试验 | 第41-42页 |
| ·重复性试验 | 第42-43页 |
| ·VP3 Ⅰ-ELISA和DHAV-1 Ⅰ-ELISA之间符合率的评估 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-48页 |
| ·DHAV-1 VP3的原核表达、纯化及鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的抗血清中和活性检测及B细胞抗原表位鉴定 | 第44-46页 |
| ·基于VP3蛋白的间接ELISA方法的建立 | 第46-48页 |
| 三、结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第57页 |
