| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·CRISPR/Cas9系统及其发展历程 | 第13-14页 |
| ·CRISPR/Cas9系统在基因组编辑领域大放异彩 | 第14-16页 |
| ·脱靶效应是CRISPR系统应用的最大障碍之一 | 第16-20页 |
| ·脱靶效应的发现 | 第16-17页 |
| ·脱靶效应的原理 | 第17页 |
| ·脱靶效应的检测 | 第17-18页 |
| ·降低脱靶效应的策略 | 第18-20页 |
| ·非天然氨基酸引入系统及其应用 | 第20-24页 |
| ·非天然氨基酸引入系统 | 第20-21页 |
| ·非天然氨基酸引入系统的应用 | 第21-24页 |
| ·基于SSA原理的双荧光素酶报告系统 | 第24-25页 |
| 第二章 引言 | 第25-27页 |
| ·背景及立题意义 | 第25页 |
| ·技术路线 | 第25-27页 |
| 第三章 非天然氨基酸引入系统的建立 | 第27-37页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·主要实验试剂 | 第27-29页 |
| ·实验主要仪器 | 第29页 |
| ·T-hA4-PylRS-NLS载体构建 | 第29-31页 |
| ·双酶切 | 第29-30页 |
| ·目的DNA片段回收 | 第30页 |
| ·DNA片段的连接 | 第30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·菌液电泳 | 第30-31页 |
| ·超纯质粒提取 | 第31页 |
| ·双荧光报告载体T-hA4-DsRed（TAG）EGFP的构建 | 第31-32页 |
| ·T-U6-tRNA载体构建 | 第32页 |
| ·细胞转染 | 第32页 |
| ·细胞的DAPI染色及显微荧光观察 | 第32-33页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE | 第33页 |
| ·Western Blot | 第33-34页 |
| ·实验结果与讨论 | 第34-36页 |
| ·总结 | 第36-37页 |
| 第四章 利用非天然氨基酸提高基因组编辑的安全性 | 第37-41页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·细胞培养基的配制 | 第37页 |
| ·细胞复苏 | 第37页 |
| ·细胞转染 | 第37-38页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| ·RNA的反转录 | 第38页 |
| ·cDNA的质量检测及RT-PCR | 第38-39页 |
| ·实验结果及讨论 | 第39-40页 |
| ·总结 | 第40-41页 |
| 第五章 利用非天然氨基酸提高基因组编辑的特异性 | 第41-45页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·基因组DNA提取 | 第41页 |
| ·细胞突变位点的测序 | 第41-42页 |
| ·实验结果及讨论 | 第42-44页 |
| ·总结 | 第44-45页 |
| 综合讨论与展望 | 第45-47页 |
| 论文创新点 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 在读期间发表的论文和参研的项目 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |