| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-30页 |
| ·热胁迫对酿酒酵母产生的不利影响 | 第14页 |
| ·热诱导的氧化胁迫对酿酒酵母产生的不利影响 | 第14-15页 |
| ·酿酒酵母热耐受机制 | 第15-19页 |
| ·酿酒酵母的热休克应答及氧化胁迫应答 | 第15-19页 |
| ·热休克应答 | 第16页 |
| ·氧化胁迫应答 | 第16-17页 |
| ·热激蛋白在酿酒酵母中的耐热机制 | 第17-18页 |
| ·抗氧化酶在酿酒酵母中抗氧化机制 | 第18-19页 |
| ·海藻糖在酿酒酵母中耐热机制 | 第19页 |
| ·嗜热微生物的耐热机制 | 第19-23页 |
| ·DNA 及 RNA 热稳定性 | 第19-20页 |
| ·嗜热蛋白质空间结构及嗜热酶 | 第20-21页 |
| ·存在于嗜热微生物的热激蛋白 | 第21-23页 |
| ·特殊的细胞膜结构 | 第23页 |
| ·酿酒酵母耐热性改造 | 第23-25页 |
| ·提高酿酒酵母耐热性的传统方法 | 第23-24页 |
| ·合成生物系统中微生物耐热机制的应用 | 第24-25页 |
| ·利用抗氧化机制提高细胞耐热性 | 第25页 |
| ·合成生物技术及应用 | 第25-28页 |
| ·对标准元件的挖掘 | 第25-26页 |
| ·对底盘宿主的改造 | 第26页 |
| ·多种 DNA 拼接技术 | 第26-28页 |
| ·本论文的研究意义及研究路线 | 第28-30页 |
| ·研究意义 | 第28-29页 |
| ·研究路线 | 第29-30页 |
| 第2章 材料与方法 | 第30-50页 |
| ·材料 | 第30-35页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·药品和试剂 | 第30-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-50页 |
| ·菌体培养 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌的热激转化 | 第36页 |
| ·酿酒酵母基因组 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·基因组 DNA 的提取(嗜热栖热菌,CTAB/NACL 法） | 第37页 |
| ·含有热激蛋白元器件及 SOD 元器件质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌重组质粒的提取 | 第38页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·酿酒酵母电击转化 | 第39页 |
| ·酿酒酵母质粒的提取（博迈德质粒提取试剂盒） | 第39-43页 |
| ·含有热激蛋白与 SOD 组合元器件菌株的构建 | 第43页 |
| ·酿酒酵母 RNA 的提取 | 第43-44页 |
| ·RNA 的反转录 | 第44-46页 |
| ·QRT-PCR | 第46-47页 |
| ·酿酒酵母模拟真实发酵的梯度升温培养 | 第47页 |
| ·酿酒酵母恒定高温培养 | 第47-48页 |
| ·酿酒酵母涂布平板法细胞存活率测定 | 第48页 |
| ·酿酒酵母的活性检测（CCK 法） | 第48页 |
| ·酿酒酵母氧化抗性的测定 | 第48页 |
| ·高温下酿酒酵母活性氧自由基水平含量的测定 | 第48-49页 |
| ·实验室酿酒酵母高温乙醇发酵 | 第49页 |
| ·工业乙醇酿酒酵母高温发酵 | 第49-50页 |
| 第3章 热激蛋白元件与 SOD 元件的挖掘与元器件设计组装 | 第50-65页 |
| 引言 | 第50页 |
| ·热激蛋白元件与 SOD 元件的挖掘整理 | 第50-52页 |
| ·热激蛋白元器件与 SOD 元器件的设计与构建 | 第52-62页 |
| ·耐热基因与抗氧化基因的克隆 | 第52-54页 |
| ·热激蛋白元器件与 SOD 元器件的设计与组装 | 第54-58页 |
| ·耐热重组质粒与抗氧化重组质粒的构建 | 第58-60页 |
| ·含有热激蛋白元器件与 SOD 元器件酿酒酵母工程菌的构建 | 第60-62页 |
| ·热激蛋白基因与 SOD 基因转录水平考察 | 第62-64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| 第4章 热激蛋白与 SOD 组合元器件的设计与构建 | 第65-77页 |
| 引言 | 第65页 |
| ·热激蛋白元器件的筛选 | 第65-70页 |
| ·工程菌梯度升温发酵与热激蛋白元器件的初步筛选 | 第65-67页 |
| ·工程菌恒定高温发酵与热激蛋白元器件的进一步筛选 | 第67-68页 |
| ·耐热工程酵母细胞存活率表征 | 第68-70页 |
| ·SOD 元器件的筛选 | 第70-72页 |
| ·工程酵母氧化胁迫下的细胞存活率 | 第70页 |
| ·高温下酵母体内 ROS 水平 | 第70-72页 |
| ·热激蛋白与 SOD 组合元器件的构建及表征 | 第72-76页 |
| ·热激蛋白与 SOD 组合元器件的设计与构建 | 第72-75页 |
| ·含有热激蛋白与 SOD 组合元器件的工程酵母耐热验证 | 第75-76页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| 第5章 耐热酿酒酵母的功能验证及应用 | 第77-85页 |
| 引言 | 第77-78页 |
| ·耐热酿酒酵母高温乙醇发酵 | 第78-79页 |
| ·耐热酿酒酵母生长情况 | 第78页 |
| ·耐热酿酒酵母产乙醇情况 | 第78-79页 |
| ·耐热工业酿酒酵母工程菌高温乙醇发酵 | 第79-84页 |
| ·耐热工业酿酒酵母工程菌的构建 | 第79-80页 |
| ·耐热工业酿酒酵母高温乙醇发酵 | 第80-84页 |
| ·结论 | 第84-85页 |
| 第6章 结论与展望 | 第85-88页 |
| ·结论 | 第85-86页 |
| ·展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-95页 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 | 第95-96页 |
| 发表文章 | 第95页 |
| 发表专利 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
