| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| ·札幌病毒的发现及命名 | 第12页 |
| ·生物学分类地位 | 第12-13页 |
| ·物理特性和稳定性 | 第13页 |
| ·基因结构及功能 | 第13页 |
| ·基因组序列和基因分型 | 第13-14页 |
| ·基因重组 | 第14-15页 |
| ·主要毒株的出现和演变 | 第14页 |
| ·重组毒株 | 第14-15页 |
| ·结构蛋白研究现状 | 第15页 |
| ·VP1的研究现状 | 第15页 |
| ·VP2的研究现状 | 第15页 |
| ·非结构蛋白研究现状 | 第15-16页 |
| ·细胞培养和动物感染实验 | 第16-17页 |
| ·传播途径和宿主易感性 | 第17页 |
| ·流行状况 | 第17-18页 |
| ·国外流行状况 | 第17页 |
| ·国内流行状况 | 第17-18页 |
| ·临床症状 | 第18页 |
| ·受体研究 | 第18页 |
| ·检测方法 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR检测方法 | 第19页 |
| ·ELISA检测方法 | 第19页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第19-20页 |
| ·目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PoSaV CH430株VPg、3C、3D、p70和VP2的原核表达及多抗的制备 | 第21-34页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·菌种、毒株和载体 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| ·培养基及溶液 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·病毒总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·VPg、3C、3D、p70、VP2基因的RT-PCR扩增 | 第24页 |
| ·纯化回收VPg、3C、3D、p70、VP2基因 | 第24页 |
| ·VPg、3C、3D、p70、VP2基因与pMD19-T simple载体连接，构建重组质粒 | 第24页 |
| ·重组质粒的转化及菌落筛选 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA提取 | 第25页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定及目的基因序列测定 | 第25页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·VPg、3C、3D、p70、VP2蛋白表达 | 第26页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第26页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第26页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·兔源多抗的制备 | 第27页 |
| ·Western-blot分析 | 第27页 |
| ·ELISA测定超免疫血清的效价 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·VPg、3C、3D、p70、VP2基因的RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·重组pMD19T-VPg/3C/3D/p70/VP2质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·重组原核表达载体pET30a-VPg/3C/3D/p70/VP2的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第30页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·Western-blot鉴定 | 第31-32页 |
| ·抗体效价的检测 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 酵母双杂交系统筛选与VP2相互作用的宿主蛋白 | 第34-43页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·实验动物 | 第34页 |
| ·菌株、表达载体及文库 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第34-35页 |
| ·VP2蛋白基因的引物设计 | 第35页 |
| ·VP2蛋白基因的PCR扩增 | 第35页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-VP2的构建 | 第35页 |
| ·酵母双杂交试验 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-40页 |
| ·猪小肠上皮组织总RNA的提取及均一化cDNA文库的构建 | 第36-37页 |
| ·猪小肠粘膜上皮组织cDNA文库的鉴定 | 第37-38页 |
| ·诱饵蛋白VP2的毒性检测和自激活检测 | 第38-39页 |
| ·酵母双杂交筛选猪小肠粘膜上皮组织cDNA文库 | 第39页 |
| ·阳性克隆测序结果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-43页 |
| 第四章 全文结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52页 |
