| 附件 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| ·3-PBA研究进展 | 第13-15页 |
| ·3-苯氧基苯甲酸概况 | 第13页 |
| ·3-苯氧基苯甲酸相关的微生物代谢研究 | 第13-14页 |
| ·微生物降解 3-苯氧基苯甲酸的途径 | 第14-15页 |
| ·常规检测 3-PBA方法 | 第15-16页 |
| ·HPLC法测定土壤中 3-PBA浓度 | 第15-16页 |
| ·气质联用检测尿液中 3-PBA残留浓度 | 第16页 |
| ·HPLC法测定微生物培养体系中 3-PBA | 第16页 |
| ·结合分散液-液微萃取和注射.硅烷基化及MIP的新方法 | 第16页 |
| ·基因组文库技术应用 | 第16-18页 |
| ·基因组文库简介 | 第16-18页 |
| ·基因组文库应用 | 第18页 |
| ·原核表达研究概况 | 第18-19页 |
| ·本研究背景、意义与技术路线 | 第19-22页 |
| ·研究背景、意义与创新点 | 第19-21页 |
| ·技术路线图 | 第21-22页 |
| 第二章 HPLC法检测不动杆菌对 3-PBA降解能力 | 第22-27页 |
| ·材料与试剂 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·实验仪器 | 第22页 |
| ·化学试剂 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·4-D菌的活化与降解驯化 | 第23页 |
| ·HPLC检测 4-D降解体系中的 3-PBA浓度 | 第23页 |
| ·3-苯氧基苯甲酸标准曲线的绘制 | 第23页 |
| ·绘制3-PBA降解曲线 | 第23-24页 |
| ·实验结果与分析 | 第24-25页 |
| ·3-PBA检测方法确定 | 第24页 |
| ·3-PBA标准曲线 | 第24-25页 |
| ·4-D菌、大肠杆菌JM109及转化载体pUC19的JM109对 3-PBA的降解情况 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 构建不动杆菌（Acinetobactersp.）基因组文库 | 第27-33页 |
| ·材料与试剂 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·实验仪器 | 第27页 |
| ·化学试剂 | 第27-28页 |
| ·试验方法 | 第28-30页 |
| ·基因组DNA提取 | 第28页 |
| ·质粒DNA提取 | 第28页 |
| ·基因组DNA部分酶切体系 | 第28-29页 |
| ·载体DNA完全酶切体系及 5’磷酸基团去磷酸化处理 | 第29页 |
| ·连接体系 | 第29页 |
| ·感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·基因组文库验证 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-31页 |
| ·基因组DNA与质粒DNA提取和酶切验证 | 第30-31页 |
| ·目的片段与载体的连接转化及文库随机验证 | 第31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 文库池筛获得 3-PBA降解重组子 | 第33-41页 |
| ·材料与试剂 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第33-34页 |
| ·混合池构建及驯化筛选 | 第34页 |
| ·序列验证、测序与ORF分析 | 第34页 |
| ·氨基酸结构预测与分析 | 第34页 |
| ·实验结果 | 第34-40页 |
| ·阳性重组载体验证 | 第34-35页 |
| ·ORF比对 | 第35-36页 |
| ·921 bp ORF序列信息 | 第36-37页 |
| ·Blast比对结果 | 第37页 |
| ·氨基酸序列分析及三级结构预测 | 第37-40页 |
| ·实验讨论 | 第40-41页 |
| 第五章 3-PBA降解关键基因克隆与表达载体构建 | 第41-52页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要试剂配制 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·实验路线 | 第42-43页 |
| ·pET-21b-D34表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·重组表达载体工程菌的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·重组表达载体工程菌的降解验证 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-51页 |
| ·目的基因的获得 | 第46页 |
| ·D34与T载体的连接转化与阳性重组双酶切验证 | 第46-48页 |
| ·D34与pET-21b载体的连接与重组载体验证 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE分析工程菌的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·芳香族底物反应实验 | 第50页 |
| ·重组表达菌降解验证 | 第50-51页 |
| ·降解酶最适条件优化 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第六章 全文结论与展望 | 第52-53页 |
| ·全文结论 | 第52页 |
| ·展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
