| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 1 引言 | 第13-23页 |
| ·荧光的简要介绍 | 第13-15页 |
| ·荧光的产生 | 第13-14页 |
| ·荧光的基本特性 | 第14页 |
| ·荧光寿命的测量 | 第14-15页 |
| ·镧系金属离子的介绍 | 第15-19页 |
| ·镧系金属元素概况 | 第15-16页 |
| ·镧系金属离子产生荧光机制 | 第16-17页 |
| ·常用镧系金属离子Tb~(3+)和Eu~(3+)的荧光特性 | 第17-19页 |
| ·镧系金属结合标签(LBT)的介绍 | 第19-23页 |
| ·镧系金属结合标签的发展 | 第19-20页 |
| ·镧系金属结合标签的应用 | 第20页 |
| ·荧光共振能量转移 | 第20-23页 |
| 2 镧系金属结合标签的改进 | 第23-37页 |
| ·引言 | 第23-24页 |
| ·材料和方法 | 第24-28页 |
| ·样品制备 | 第24-26页 |
| ·蛋白质氨基酸序列 | 第24-25页 |
| ·人源泛素碳端连接野生型镧系金属结合标签 | 第24页 |
| ·人源泛素碳端连接T4W突变型镧系金属结合标签 | 第24页 |
| ·人源泛素碳端连接N6W突变型镧系金属结合标签 | 第24页 |
| ·人源泛素碳端连接I10W突变型镧系金属结合标签 | 第24页 |
| ·人源泛素碳端连接I10Y/D14W突变型镧系金属结合标签 | 第24页 |
| ·人源泛素碳端连接I10Y/T4W突变型镧系金属结合标签 | 第24-25页 |
| ·野生型镧系金属结合标签 | 第25页 |
| ·T4W突变型镧系金属结合标签 | 第25页 |
| ·样品制备buffer | 第25页 |
| ·蛋白质的表达与纯化 | 第25-26页 |
| ·Ub-LBT的表达和纯化 | 第25-26页 |
| ·荧光实验的样品制备 | 第26页 |
| ·NMR实验的样品制备 | 第26页 |
| ·LBT的荧光滴定实验 | 第26-27页 |
| ·LBT的荧光光谱扫描实验 | 第27-28页 |
| ·NMR实验 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-33页 |
| ·突变对镧系金属结合标签与镧系金属离子结合强度的影响 | 第28-30页 |
| ·不同突变型LBT荧光量子产率的变化 | 第30-32页 |
| ·T4W突变对Ub-LBT结构的影响 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-36页 |
| ·LBT-WT和LBT-T4W连接在泛素前后与Tb~(3+)结合强度的变化 | 第33-34页 |
| ·LBT-WT和LBT-T4W连接在泛素前后荧光量子产率的变化 | 第34-36页 |
| ·结论 | 第36-37页 |
| 3 基于镧系金属结合标签的荧光组合探针的开发 | 第37-49页 |
| ·引言 | 第37-38页 |
| ·材料和方法 | 第38-42页 |
| ·样品制备 | 第38-40页 |
| ·蛋白质氨基酸序列 | 第38页 |
| ·人源泛素碳端连接野生型镧系金属结合标签 | 第38页 |
| ·人源泛素碳端连接W9C突变型镧系金属结合标签 | 第38页 |
| ·样品制备buffer | 第38-39页 |
| ·蛋白质的表达与纯化 | 第39-40页 |
| ·Ub-LBT的表达和纯化 | 第39页 |
| ·蛋白连接荧光探针连接实验 | 第39-40页 |
| ·蛋白连接荧光探针连接实验 | 第40页 |
| ·荧光光谱扫描实验 | 第40-41页 |
| ·荧光滴定实验 | 第41-42页 |
| ·荧光寿命的测定 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-47页 |
| ·组合探针与镧系金属离子结合强度的测定 | 第42-43页 |
| ·组合探针结合Eu~(3+)光谱特性的测定 | 第43-44页 |
| ·组合探针结合Sm~(3+)光谱特性的测定 | 第44-45页 |
| ·组合探针荧光寿命的测定 | 第45-46页 |
| ·组合探针荧光成像 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 4 基于镧系金属结合标签应用LRET研究RSV-CAPSID的结构域之间相互作用 | 第49-65页 |
| ·引言 | 第49-51页 |
| ·材料和方法 | 第51-57页 |
| ·样品制备 | 第51-56页 |
| ·蛋白质氨基酸序列 | 第51-53页 |
| ·劳氏肉瘤病毒 | 第51-52页 |
| ·劳氏肉瘤病毒R86C | 第52页 |
| ·劳氏肉瘤病毒R97C | 第52页 |
| ·劳氏肉瘤病毒E7C | 第52页 |
| ·劳氏肉瘤病毒R86C连接镧系金属结合标签 | 第52页 |
| ·劳氏肉瘤病毒R97C连接镧系金属结合标签 | 第52-53页 |
| ·劳氏肉瘤病毒E7C连接镧系金属结合标签 | 第53页 |
| ·样品制备buffer | 第53页 |
| ·蛋白质的表达与纯化 | 第53-56页 |
| ·RSV-LBT的表达和纯化 | 第53-54页 |
| ·RSV的表达和纯化 | 第54页 |
| ·蛋白连接荧光探针5-TMRIA | 第54-55页 |
| ·连接有5-TMRIA的蛋白连接Tb~(3+) | 第55-56页 |
| ·荧光发射光谱扫描实验 | 第56页 |
| ·荧光寿命的测定 | 第56-57页 |
| ·结果 | 第57-63页 |
| ·时间分辨发射谱确认LRET发生 | 第57-59页 |
| ·RSV capsid存在分子间的LRET | 第59-60页 |
| ·RSV capsid两个结构域之间的距离 | 第60-61页 |
| ·二价离子对RSV capsid两个结构域之间的距离的影响 | 第61-62页 |
| ·磷酸盐对RSV capsid两个结构域之间的距离的影响 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 5 总结与展望 | 第65-68页 |
| ·镧系金属结合标签的改进不能增加荧光量子产率 | 第65页 |
| ·基于镧系金属结合标签的组合探针的设计 | 第65页 |
| ·基于镧系金属结合标签的LRET研究RSV分子内相互作用 | 第65-66页 |
| ·展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录A：稳态荧光光谱检测 | 第73-75页 |
| 附录B：时间分辨荧光激发谱检测 | 第75-77页 |
| 附录C：磷光寿命检测 | 第77-79页 |
| 附录D：凡的计算 | 第79-82页 |
| 英文简写索引 | 第82-84页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第84页 |
