| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| ·生物大分子核磁共振 | 第10-11页 |
| ·~(19)F NMR在生物大分子结构研究中的应用 | 第11-14页 |
| ·蛋白质~(19)F标记方法 | 第11页 |
| ·~(19)F NMR研究方法 | 第11-13页 |
| ·~(19)FNMR在蛋白质结构研究中的应用 | 第13-14页 |
| ·条件无序蛋白 | 第14-16页 |
| ·肠道病原菌抗酸性机制 | 第16-18页 |
| ·本论文研究目的、内容及意义 | 第18-20页 |
| 2 ~(19)F NMR定量监测HdeA活化过程 | 第20-32页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料与方法 | 第20-23页 |
| ·样品制备 | 第20-22页 |
| ·未标记HdeA的表达 | 第21页 |
| ·~(15)N标记HdeA的表达 | 第21页 |
| ·~(19)F~(15)N双标记HdeA的表达 | 第21页 |
| ·HdeA的纯化 | 第21-22页 |
| ·pH滴定的NMR实验 | 第22页 |
| ·圆二色谱测量T_m实验 | 第22页 |
| ·分子伴侣活性实验 | 第22-23页 |
| ·结果与讨论 | 第23-30页 |
| ·HdeA在酸性条件下呈现部分非折叠构象 | 第23-24页 |
| ·~(19)F NMR信号归属 | 第24-25页 |
| ·pH滴定实验 | 第25-28页 |
| ·突变体的pH滴定实验 | 第28-29页 |
| ·圆二色谱测定蛋白热稳定性 | 第29页 |
| ·HdeA构象非折叠与活性的关系 | 第29-30页 |
| ·结论 | 第30-32页 |
| 3 HdeA活性构象的研究 | 第32-44页 |
| ·材料与方法 | 第32-33页 |
| ·周质提取物的制备 | 第32页 |
| ·~(19)F交换谱(EXSY) | 第32页 |
| ·底物结合的~(19)F NMR实验 | 第32-33页 |
| ·重水交换实验 | 第33页 |
| ·分子内二硫键还原的活性实验 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-41页 |
| ·5FW标记HdeA在低pH下的信号归属 | 第33-34页 |
| ·多种构象并存且发生构象交换 | 第34-35页 |
| ·~(19)FNMR观测HdeA与底物相互作用 | 第35-36页 |
| ·活性构象 | 第36-38页 |
| ·结构包埋性质 | 第38-39页 |
| ·分子内二硫键的作用 | 第39-41页 |
| ·结论 | 第41-44页 |
| 4 总结及展望 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录A 培养基及蛋白电泳配方 | 第50-51页 |
| 附录B 常用缓冲液配方 | 第51-52页 |
| 附录C 定点突变 | 第52-53页 |
| 附录D 圆二色谱操作 | 第53-54页 |
| 附录E 英文简写索引 | 第54-56页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第56页 |