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FLC途径几个关键基因及miRNAs在早实枳阶段发育中的作用机制研究

目录第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-14页
缩略词表(Abbreviaitons)第14-16页
第一章 文献综述及课题思路第16-45页
 1 课题的提出第16-17页
 2 植物成花发育研究进展第17-35页
   ·植物成花诱导第18-31页
     ·春化途径第20-22页
     ·光周期途径第22-25页
     ·自主途径第25-27页
     ·赤霉素途径第27-29页
     ·开花途径的整合第29-31页
   ·植物花的发端第31-33页
     ·茎端分生组织特征基因第31-32页
     ·花分生组织特征基因第32-33页
   ·花器官的发育第33-35页
     ·植物花发育的ABC模型第33-34页
     ·ABCD及ABCDE模型第34-35页
     ·花发育的四重奏模型第35页
 3 MADS-box家族基因研究第35-39页
   ·MADS-box的由来第35-36页
   ·MADS-box基因的类型及结构第36-37页
   ·植物MADS-box基因功能的多样性第37-39页
     ·MADS-box基因对成花发育的调控第37-38页
     ·MADS-box基因对营养生长的调控第38页
     ·MADS-box基因对果实及胚珠发育的调控第38-39页
 4 高等植物启动子研究概述第39-43页
   ·启动子的概念及结构特征第39-40页
   ·植物启动子的类型及应用第40-43页
     ·组成型启动子第40-41页
     ·诱导型启动子第41页
     ·组织特异型启动子第41-43页
 5 本研究的内容、目的和意义第43-45页
第二章 早实枳PtFLC基因不同转录本作用机制研究第45-69页
 1 引言第45-47页
 2 材料与方法第47-57页
   ·实验材料第47-48页
     ·植物材料第47页
     ·菌种和质粒第47页
     ·试剂和仪器第47-48页
   ·实验方法第48-57页
     ·植物总RNA的提取及纯化第48页
     ·第一链cDNA的合成第48-49页
     ·PtFLC各转录本序列分离第49-50页
     ·PtFLC启动子的克隆第50-51页
     ·PtFLC启动子的序列分析第51页
     ·相关载体构建第51-52页
     ·转录活性分析第52页
     ·根癌农杆菌介导的拟南芥遗传转化第52-54页
     ·酵母单、双杂交文库构建及筛选第54-55页
     ·PtFLC启动子GUS活性分析第55-57页
 3 结果与分析第57-66页
   ·PtFLC各转录本序列结构分析第57-58页
   ·各转录本转录活性分析第58-59页
   ·PtFLC各转录本在拟南芥中的异位表达第59-61页
   ·PtFLC互作蛋白筛选第61-62页
   ·PtFLC启动子序列顺式元件预测第62-63页
   ·PtFLC上游调节因子筛选第63-64页
   ·PtFLC启动子时空表达分析第64-66页
 4 讨论第66-69页
第三章 早实枳AP1同源基因的分离、表达及功能分析第69-86页
 1 引言第69-70页
 2 材料与方法第70-73页
   ·实验材料第70页
     ·植物材料第70页
     ·菌种和质粒第70页
   ·实验方法第70-73页
     ·PtAP1基因的扩增第70页
     ·相关基因表达分析第70-71页
     ·PtAP1启动子的分离及序列分析第71页
     ·表达载体及报告载体的构建第71-72页
     ·PtAP1的亚细胞定位第72页
     ·根癌农杆菌介导的拟南芥遗传转化第72页
     ·启动子的GUS活性分析第72页
     ·酵母单杂交文库的筛选及互作验证第72-73页
 3 结果与分析第73-83页
   ·PtAP1氨基酸序列比对与进化分析第73-75页
   ·早实枳内源PtAP1基因表达分析第75-76页
   ·赤霉素和脱落酸处理对PtAP1表达的影响第76-77页
   ·PtAP1蛋白亚细胞定位第77页
   ·PtAP1基因在转基因拟南芥中的表型分析第77-80页
   ·PtAP1启动子的克隆及元件预测第80-81页
   ·PtAP1启动子的时空表达模式分析第81-83页
   ·PtAP1上游调控因子的鉴定第83页
 4 讨论第83-86页
第四章 柑橘AGL24同源基因的克隆及功能鉴定第86-106页
 1 引言第86-87页
 2 材料与方法第87-90页
   ·实验材料第87页
     ·植物材料第87页
     ·菌种和质粒第87页
   ·实验方法第87-90页
     ·总RNA的提取及PtAGL24基因cDNA的分离第87-88页
     ·PtAGL24基因转录水平分析第88页
     ·PtAGL24启动子的克隆及生物信息学分析第88页
     ·表达载体构建第88-89页
     ·PtAGL24亚细胞定位第89页
     ·拟南芥的转化及转基因植株的分子鉴定第89页
     ·扫描电镜分析第89页
     ·酵母双杂交分析第89-90页
     ·启动子组织化学染色及定量检测第90页
 3 结果与分析第90-103页
   ·早实枳PtAGL24 MADS-box基因的分离及序列分析第90-93页
   ·PtAGL24在早实枳发育过程中的表达第93-94页
   ·PtAGL24蛋白的亚细胞定位分析第94页
   ·蛋白互作分析第94-95页
   ·异位表达PtAGL24引起转基因拟南芥的早花及形态改变第95-98页
   ·PtAGL24与拟南芥异源MADS蛋白的互作第98-99页
   ·PtAGL24启动子的分离及结构分析第99-101页
   ·PtAGL24启动子在转基因拟南芥中的时空表达模式第101-103页
 4 讨论第103-106页
第五章 早实枳与普通枳中miRNA的比较分析第106-119页
 1 引言第106-107页
 2 材料与方法第107-108页
   ·实验材料第107页
   ·实验方法第107-108页
     ·总RNA的提取第107页
     ·小RNA文库的构建及测序第107页
     ·保守的及新颖的miRNAs的发掘第107-108页
     ·miRNA潜在靶基因的预测及功能注释第108页
     ·茎环定量RT-PCR扩增第108页
     ·靶基因的区域定量RT-PCR检测第108页
 3 结果与分析第108-117页
   ·小RNA文库的Solexa测序及筛选第108-111页
   ·保守的和新颖的候选miRNAs的鉴定第111-112页
   ·保守的和新颖的miRNA的表达模式第112页
   ·候选miRNA的表达分析第112页
   ·miRNA靶基因的预测及功能注释第112-115页
   ·miRNA所靶定mRNA的区域表达检测第115-117页
 4 讨论第117-119页
第六章 全文小结与展望第119-122页
 1 小结与推论第119-120页
 2 主要创新点第120-121页
 3 研究展望第121-122页
参考文献第122-139页
附录(Appendix)第139-159页
 附录Ⅰ 部分实验操作第139-142页
 附录Ⅱ 附表第142-158页
 附录Ⅲ 发表和准备发表论文第158-159页
致谢第159页

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