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MAPK-CEBPβ对猪颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌的调控作用和机制的研究

目录第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-14页
缩略词(Abbreviation)第14-15页
第一章 文献综述第15-27页
 前言第15页
 1 卵泡发育第15-16页
 2 卵泡发育的调控第16-21页
   ·生殖激素对卵泡发育的调节第17-19页
     ·促性腺激素释放激素第17页
     ·促性腺激素第17-18页
     ·类固醇激素第18-19页
   ·细胞因子对卵泡发育的调节第19-21页
     ·胰岛素样生长因子(IGF)第19-20页
     ·表皮生长因子(EGF)第20页
     ·转化生长因子(TGF)和肿瘤坏死因子(TNF)第20-21页
 3 卵泡发育及排卵调控通路的研究第21-24页
   ·MAPK-CEBPα/β信号通路在卵泡发育及排卵中的作用第21-22页
   ·PKC信号通路在卵泡发育及排卵中的作用第22页
   ·cAMP-PKA信号通路在卵泡发育及排卵中的作用第22页
   ·钙离子信号通路在卵泡发育及排卵中的作用第22-23页
   ·其他相关因子在卵泡发育及排卵中的作用第23-24页
 4 颗粒细胞凋亡第24-26页
   ·细胞凋亡的概念第24页
   ·细胞凋亡的生物学意义第24页
   ·颗粒细胞凋亡的研究第24页
   ·颗粒细胞与卵泡及卵母细胞发育第24-26页
 5 研究目的与意义第26-27页
第二章 U0126和RU486对猪卵泡颗粒细胞的作用及其机制研究第27-56页
 1 引言第27-28页
 2 材料与方法第28-33页
   ·材料第28页
     ·实验材料第28页
     ·主要试剂盒第28页
   ·方法第28-33页
     ·猪卵泡颗粒细胞的分离、培养和处理第28-29页
     ·颗粒细胞总蛋白的提取第29-30页
     ·颗粒细胞总RNA提取及检测第30页
     ·RT-PCR合成第一链cDNA第30页
     ·颗粒细胞凋亡、周期、激素分泌相关基因的相对表达量分析第30-31页
     ·Western blot分析第31-32页
     ·U0126和RU486对猪颗粒细胞凋亡影响检测第32页
     ·U0126和RU486对猪颗粒细胞周期的影响检测第32-33页
     ·U0126和RU486对颗粒细胞中类固醇激素分泌量影响检测第33页
   ·统计分析第33页
 3. 结果与分析第33-46页
   ·LH/hCG对猪颗粒细胞中CEBPβ表达水平的影响第33-34页
   ·U0126和RU486对猪颗粒细胞形态的影响第34-35页
   ·U0126和RU486对CEBPβ及相关基因蛋白水平的影响第35-36页
   ·FBS不影响U0126和RU486对猪颗粒细胞的作用第36-37页
   ·U0126和RU486对p-p38MAPK蛋白表达的调控第37-38页
   ·U0126和RU486显著改变猪颗粒细胞周期第38-39页
   ·U0126和RU486显著影响猪颗粒细胞凋亡的变化第39-40页
   ·U0126和RU486显著降低猪颗粒细胞中类固醇激素分泌第40-42页
   ·猪颗粒细胞总RNA检测第42页
   ·U0126和RU486对颗粒细胞CEBPβ mRNA水平的影响第42-43页
   ·U0126和RU486对颗粒细胞中周期及凋亡相关基因mRNA水平的影响第43-45页
   ·U0126和RU486对颗粒细胞中4个重要功能基因mRNA水平的影响第45-46页
 4 讨论分析第46-54页
   ·LH和hCG显著促进颗粒细胞CEBPβ的表达第46页
   ·U0126和RU486显著影响CEBPβ和p-ERK1/2蛋白的表达第46-48页
     ·U0126显著降低猪颗粒细胞中CEBPβ蛋白的表达第46-47页
     ·RU486显著降低猪颗粒细胞中CEBPβ和p-ERK1/2蛋白的表达第47-48页
   ·FBS不影响U0126和RU486对猪颗粒细胞的作用第48页
   ·U0126和RU486可能通过p-p38MAPK调控CEBPβ的表达第48-49页
   ·U0126和RU486显著影响猪颗粒细胞的凋亡第49-50页
     ·U0126抑制猪颗粒细胞的凋亡第49页
     ·RU486促进猪颗粒细胞的凋亡第49页
     ·猪颗粒细胞凋亡基因的相对表达变化第49-50页
   ·U0126和RU486显著影响猪颗粒细胞周期的分布第50-51页
     ·U0126显著改变猪颗粒细胞周期的分布第50-51页
     ·RU486显著改变猪颗粒细胞周期的分布第51页
     ·U0126和RU486显著影响猪颗粒细胞周期调控基因的相对表达量第51页
   ·U0126和RU486显著降低猪颗粒细胞中类固醇激素水平第51-52页
   ·U0126和RU486调控猪颗粒细胞中关键功能基因的表达第52-53页
   ·U0126和RU486对猪颗粒细胞的的调控机制第53-54页
 5 小结第54-56页
第三章 干扰CEBPβ对猪卵泡颗粒细胞的影响及其机制研究第56-81页
 1 引言第56-57页
 2 材料与方法第57-64页
   ·材料第57页
     ·实验材料第57页
     ·干扰载体第57页
     ·主要试剂盒第57页
   ·方法第57-63页
     ·猪卵泡颗粒细胞的分离和培养第57-58页
     ·CEBPβ基因RNAi重组干扰质粒构建第58-60页
     ·重组质粒克隆及纯化第60页
     ·重组质粒转染猪颗粒细胞第60-61页
     ·颗粒细胞总蛋白的提取第61页
     ·颗粒细胞总RNA提取及检测第61页
     ·RT-PCR合成第一链cDNA第61页
     ·颗粒细胞中基因的相对表达量检测第61-62页
     ·Western blot分析第62页
     ·颗粒细胞凋亡检测第62-63页
     ·颗粒细胞周期检测第63页
     ·颗粒细胞类固醇激素分泌量检测第63页
   ·统计分析第63-64页
 3 结果与分析第64-72页
   ·CEBPβ基因RNAi重组质粒第64-65页
   ·重组质粒CEBPβ转染猪颗粒细胞第65页
   ·猪颗粒细胞总RNA提取检测第65-66页
   ·CEBPβRNAi重组质粒干扰效率mRNA水平检测第66-67页
   ·CEBPβ RNAi后对CEBPβ及p-ERK1/2蛋白水平影响第67-68页
   ·CEBPβ RNA干扰对激素分泌水平及调控的影响第68-69页
   ·CEBPβ RNA干扰对猪颗粒细胞周期的影响第69-70页
   ·CEBPβ RNA干扰对猪颗粒细胞凋亡的影响第70页
   ·CEBPβ RNA干扰对颗粒细胞周期及凋亡相关基因表达的影响第70-71页
   ·CEBPβ RNA对颗粒细胞中4个重要功能基因表达的影响第71-72页
 4 讨论分析第72-79页
   ·CEBPβ基因RNAi效果显著第72-73页
   ·CEBPβ干扰后增加p-ERK1/2的蛋白表达,降低ERK2蛋白表达第73-74页
   ·CEBPβ对猪颗粒细胞凋亡的影响第74-75页
   ·CEBPβ显著改变猪颗粒细胞周期的分布第75-76页
   ·CEBPβ显著提高猪颗粒细胞类固醇激素水平第76-77页
   ·CEBPβ显著影响猪颗粒细胞中关键功能基因的表达第77-79页
   ·CEBPβ促进颗粒细胞凋亡的作用机制第79页
 5 小结第79-81页
全文结论第81-83页
创新与不足第83-84页
参考文献第84-102页
已发表论文第102-103页
致谢第103页

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