| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第8-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-17页 |
| ·布鲁氏菌 | 第9-11页 |
| ·布鲁氏菌的分类和分布 | 第9-10页 |
| ·布鲁氏菌逃避宿主免疫机制 | 第10-11页 |
| ·RibonucleaseⅢ(RNaseⅢ)蛋白家族 | 第11-16页 |
| ·RNaseⅢ的发现 | 第11-12页 |
| ·RNaseⅢ分类 | 第12-14页 |
| ·RNaseⅢ的结构 | 第14-15页 |
| ·RNaseⅢ影响细菌基因表达调控 | 第15-16页 |
| ·研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 第2章 材料和方法 | 第17-29页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌株及质粒 | 第17页 |
| ·引物 | 第17-18页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第18页 |
| ·试剂、抗生素及培养基 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-29页 |
| ·PCR克隆布鲁氏菌rncS基因 | 第19页 |
| ·重叠PCR克隆rncS基因突变型E54A/D61A/E81A/E133A | 第19-20页 |
| ·转录模板的PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·RNA体外转录实验 | 第21-22页 |
| ·转录RNA中DNA模板去除 | 第22页 |
| ·RNA去5’端磷酸化 | 第22-23页 |
| ·RNA末端磷酸标记 | 第23页 |
| ·PCR产物或者酶切产物的切胶回收 | 第23-24页 |
| ·质粒小量提取(OMEGA试剂盒) | 第24页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·转化 | 第24-25页 |
| ·目的片段和载体的连接 | 第25页 |
| ·rncS的原核诱导表达 | 第25-26页 |
| ·RNaseⅢ的纯化 | 第26页 |
| ·Mg~(2+)和Mg~(2+)对RNaseⅢ切割活性的影响 | 第26-27页 |
| ·Na~+和k~+对RNaseⅢ切割活性的影响 | 第27页 |
| ·pH对RNaseⅢ切割活性的影响 | 第27页 |
| ·RNA和RNaseⅢ凝胶阻滞实验(EMSA) | 第27-29页 |
| 第3章 结果与分析 | 第29-43页 |
| ·布鲁氏菌rncS基因的结构分析及比对 | 第29-30页 |
| ·pre-RNA二级结构 | 第30页 |
| ·rncS基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·RNaselⅢ的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·转录模板的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·EMSA检测RNA和RNaseⅢ的结合 | 第33-34页 |
| ·Mg~(2+)和Mg~(2+)对RNaseⅢ的酶活影响 | 第34-36页 |
| ·Mg~(2+)对RNaseⅢ的酶活影响 | 第34-35页 |
| ·Mg~(2+)对RNaseⅢ的酶活影响 | 第35-36页 |
| ·Na~+和K~+对RNaseⅢ的酶活影响 | 第36-38页 |
| ·Na~+对RNaseⅢ的酶活影响 | 第36-37页 |
| ·K~+对RNaseⅢ的酶活影响 | 第37-38页 |
| ·pH对RNaseⅢ的酶活影响 | 第38-39页 |
| ·rncS基因突变型的克隆 | 第39页 |
| ·rncS突变型E54A、D61A、E81A及E133A克隆到pET-30a(+) | 第39-40页 |
| ·RNaseⅢ突变型E54A、D61A、E81A及E133A的诱导表达及纯化 | 第40-41页 |
| ·EMSA检测突变RNaseⅢ和BM-pre-0015的结合 | 第41页 |
| ·突变型RNaseⅢ的酶活实验 | 第41-43页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
