| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-15页 |
| 1 杆状病毒的研究进展 | 第11-12页 |
| ·杆状病毒的介绍 | 第11页 |
| ·杆状病毒基因组的研究进展 | 第11页 |
| ·杆状病毒表达系统的简介 | 第11-12页 |
| 2 杆状病毒晚期基因表达因子 LEFs 的研究进展 | 第12-14页 |
| ·杆状病毒调控基因的研究 | 第12页 |
| ·与病毒 DNA 复制相关的 lef 基因 | 第12-13页 |
| ·与病毒基因转录相关的 lef 基因 | 第13-14页 |
| 3 Red 重组技术的研究进展 | 第14-15页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第15-18页 |
| 1 研究的目的及意义 | 第15页 |
| 2 研究的主要内容 | 第15-17页 |
| 3 实验流程图 | 第17-18页 |
| 第三章 lef-12 的生物信息学分析 | 第18-23页 |
| 1 生物信息学工具 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18页 |
| 3 结果 | 第18-22页 |
| ·lef-12 基因的序列分析 | 第18-19页 |
| ·LEF-12 的疏水性分析 | 第19-20页 |
| ·LEF-12 的信号肽分析 | 第20-21页 |
| ·LEF-12 的跨膜区分析 | 第21页 |
| ·LEF-12 的二级结构预测 | 第21-22页 |
| ·LEF-12 氨基酸序列的同源性分析 | 第22页 |
| 4 讨论 | 第22-23页 |
| 第四章 家蚕核型多角体病毒 lef-12 缺失型和补回型病毒的构建 | 第23-39页 |
| 1 材料与试剂 | 第23-25页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·试剂配置 | 第23-25页 |
| 2 方法 | 第25-33页 |
| ·制备 pKD46 质粒 | 第25页 |
| ·DH10Bac 感受态细胞制备和 pKD46 质粒的转化 | 第25-26页 |
| ·制备含 pKD46 质粒的 DH10Bac 菌株感受态 | 第26页 |
| ·lef-12 基因打靶线性片段的制备 | 第26-27页 |
| ·lef-12 缺失型 Bacmid 的构建 | 第27-29页 |
| ·转移载体 pFastBacHTB-lef12 的构建 | 第29-31页 |
| ·lef-12 基因补回型 Bacmid 的构建 | 第31-33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| ·lef-12 基因打靶线性化片段的鉴定 | 第33-34页 |
| ·lef-12 基因缺失型 Bacmid 的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组转移载体 pFastBacHTB-lef12 的双酶切和 PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·lef-12 基因补回型病毒 lef12-re-Bacmid 的鉴定 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第五章 lef-12 对 BmNPV 复制的影响 | 第39-48页 |
| 1 材料与试剂 | 第39页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-43页 |
| ·家蚕细胞的培养、冻存与复苏 | 第39-40页 |
| ·病毒 DNA 的提取 | 第40页 |
| ·病毒 DNA 转染家蚕 BmN 细胞 | 第40页 |
| ·病毒滴度测定 | 第40-41页 |
| ·病毒基因组的提取和消化 | 第41页 |
| ·荧光定量 PCR 分析 | 第41-43页 |
| 3 结果 | 第43-47页 |
| ·lef-12 缺失型病毒转染家蚕细胞 | 第43-44页 |
| ·lef-12 缺失型病毒的增殖曲线分析 | 第44页 |
| ·lef-12 基因缺失对病毒 DNA 复制的 qPCR 分析 | 第44-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 第六章 lef-12 对 BmNPV 病毒基因转录的影响 | 第48-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第48页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-51页 |
| ·lef-12 缺失型病毒转染 BmN 细胞 | 第48-49页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第49页 |
| ·荧光定量 PCR 引物的设计 | 第49页 |
| ·基因组 DNA 的降解 | 第49-50页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第50页 |
| ·荧光定量 PCR | 第50-51页 |
| ·荧光定量 PCR 数据分析 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-56页 |
| ·病毒早期基因 lef-3 转录水平的 qRT-PCR 分析 | 第51-52页 |
| ·病毒晚期基因 vp39 转录水平的 qRT-PCR 分析 | 第52-54页 |
| ·病毒极晚期基因 p10 转录水平的 qRT-PCR 分析 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 第七章 lef-12 对 BmNPV 基因表达的影响 | 第57-62页 |
| 1 材料与试剂 | 第57-58页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·主要试剂的配制 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-59页 |
| ·收集病毒转染的 BmN 细胞 | 第58页 |
| ·Bradford 法进行蛋白定量 | 第58页 |
| ·Western blot 检测蛋白的表达 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-61页 |
| ·LEF-12 的 Western blot 鉴定 | 第59-60页 |
| ·lef-12 对病毒晚期基因 vp39 和极晚期基因 p10 表达的影响 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第八章 BmNPV 的电子显微镜观察 | 第62-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第62页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·试剂配制 | 第62页 |
| 2 电子显微镜分析 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
