| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-18页 |
| 1 EPO 的研究进展 | 第13-15页 |
| ·EPO 的历史 | 第13页 |
| ·EPO 的生理学 | 第13-14页 |
| ·EPO 的分子生物学和细胞生物学 | 第14页 |
| ·EPO 的临床应用 | 第14页 |
| ·药物研发最新进展 | 第14-15页 |
| ·EPO 的表达 | 第15页 |
| 2 家蚕杆状病毒表达系统的研究进展 | 第15-16页 |
| 3 多肽和蛋白质药物口服给药研究进展 | 第16-18页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第18-20页 |
| 1 实验目的和意义 | 第18页 |
| 2 研究内容 | 第18-19页 |
| 3 实验设计路线图 | 第19-20页 |
| 第三章 重组人 EPO 家蚕杆状病毒的构建及鉴定 | 第20-34页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第20页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·主要溶液的配制 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-29页 |
| ·pFast BacⅠ-hEPO 重组载体的构建 | 第20-24页 |
| ·重组 Bacmid-hEPO 的构建及鉴定 | 第24-27页 |
| ·家蚕卵巢上皮细胞 BmN 细胞的复苏、培养与冻存 | 第27-28页 |
| ·重组家蚕杆状病毒 vBm-rhEPO 的构建 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-32页 |
| ·hEPO 基因的获得 | 第29页 |
| ·重组质粒 pFastBacⅠ-hEPO 的 PCR 和双酶切鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·重组 Bacmid-hEPO 的 PCR 鉴定结果 | 第30-31页 |
| ·重组病毒 vBm-rhEPO 的鉴定 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 实时荧光定量PCR 测定重组病毒 vBm-rhEPO 的滴度 | 第34-40页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第34页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-36页 |
| ·实时荧光定量 PCR 引物的设计 | 第34页 |
| ·重组 Bacmid-hEPO 的提取及含量的测定 | 第34-35页 |
| ·重组病毒 vBm-rhEPO 基因组的提取 | 第35页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第35-36页 |
| ·重组病毒 vBm-rhEPO 滴度的测定 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-39页 |
| ·荧光定量 PCR 标准曲线的绘制 | 第36-38页 |
| ·重组杆状病毒滴度的测定 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 rhEPO 蛋白在家蚕生物反应器中的表达 | 第40-47页 |
| 1 材料、试剂和仪器 | 第40页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·试剂配制 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| ·rhEPO 蛋白在家蚕卵巢上皮细胞 BmN 细胞中的表达及鉴定 | 第40-41页 |
| ·rhEPO 蛋白在五龄蚕幼虫的血淋巴中的表达及鉴定 | 第41-42页 |
| ·rhEPO 蛋白在家蚕的蛹中表达及鉴定 | 第42页 |
| ·BmrhEPO 蚕蛹冻干粉的制备及其中 rhEPO 含量的检测 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| ·rhEPO 蛋白在 BmN 细胞中表达的 SDS-PAGE 和 Western Blotting 鉴定 | 第43页 |
| ·rhEPO 蛋白在五龄蚕幼虫血淋巴中表达的 SDS-PAGE 和 Western Blotting 鉴定 | 第43-44页 |
| ·rhEPO 蛋白在家蚕的蛹中表达的 SDS-PAGE 和 Western Blotting 鉴定 | 第44-45页 |
| ·BmrhEPO 蚕蛹冻干粉的制备及其中 rhEPO 含量的检测 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第六章 BmrhEPO 蛋白体外生物学活性检测 | 第47-51页 |
| 1 材料、试剂和仪器 | 第47页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·仪器 | 第47页 |
| ·主要试剂的配制 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| ·TF-1 细胞的培养 | 第47-48页 |
| ·使用 MTT 法检测 BmrhEPO 蛋白的体外生物学活性 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-50页 |
| ·使用 MTT 法检测 BmrhEPO 蛋白的体外生物学活性 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 第七章 小鼠口服 BmrhEPO 蚕蛹粉急性毒性实验 | 第51-55页 |
| 1 材料与动物 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51页 |
| ·口服给药溶液的配制 | 第51页 |
| ·小鼠口服 BmrhEPO 蚕蛹粉急性毒性实验 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 第八章 小鼠口服 BmrhEPO 蚕蛹粉药效学实验 | 第55-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第55页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-56页 |
| ·小鼠肾性贫血模型的构建 | 第55页 |
| ·小鼠口服 BmrhEPO 蚕蛹粉药效学实验 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-60页 |
| ·小鼠肾性贫血模型的鉴定 | 第56-58页 |
| ·小鼠口服 BmrhEPO 蚕蛹粉药效学 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
