| 缩略词表 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 1. Notch信号通路 | 第11-14页 |
| 2. 脐带血干细胞研究进展简述 | 第14-15页 |
| 3. CHO细胞表达系统 | 第15-16页 |
| 4. 本课题研究内容 | 第16-17页 |
| 第一部分 高效表达Notch通路受体Delta1胞外区与IgG1 Fc融合重组CHO-S细胞系的构建 | 第17-29页 |
| 1 材料 | 第17-19页 |
| ·细胞株及载体 | 第17页 |
| ·单克隆筛选相关材料 | 第17页 |
| ·质粒构建相关材料 | 第17-18页 |
| ·蛋白鉴定相关试剂 | 第18页 |
| ·仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-23页 |
| ·Dll1ext-Fc基因表达载体pIRES2-EGFP-hDll1~(ext)-Fc的构建 | 第19-21页 |
| ·重组表达CHO-S细胞系的单克隆筛选 | 第21-22页 |
| ·筛选细胞系的上清验证 | 第22-23页 |
| 3 结果 | 第23-27页 |
| ·hDll1~(ext)-Fc基因表达载体pIRES2-EGFP-hD~(ext)-Fc的构建 | 第23-24页 |
| ·高效表达hDll1~(ext)-Fc CHO-S细胞系的克隆筛选 | 第24-25页 |
| ·筛选细胞系无血清上清检测 | 第25-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 5 结论 | 第28-29页 |
| 第二部分 高表达CHO-S细胞系的WAVE流加培养及蛋白的纯化 | 第29-40页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·细胞株 | 第29页 |
| ·培养基类型 | 第29页 |
| ·纯化及鉴定相关试剂 | 第29-30页 |
| ·仪器和设备 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·10C7细胞株的悬浮培养驯化 | 第30-31页 |
| ·10C7细胞株的扩大培养 | 第31-32页 |
| ·10C7细胞株无血清上清纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-38页 |
| ·10C7细胞株在贴壁和悬浮培养时的细胞形态及Western blot验证 | 第33-34页 |
| ·10C7细胞株在WAVE培养前期和后期活力鉴定 | 第34-35页 |
| ·10C7细胞株培养活细胞密度、细胞活力及表达量检测 | 第35-36页 |
| ·10C7细胞株培养上清的rProteinA亲和柱纯化 | 第36-37页 |
| ·纯化蛋白考马斯亮蓝G250快速染色 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 第三部分 hDll1~(ext)-Fc融合蛋白活性的初步鉴定 | 第40-47页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·蛋白及细胞株 | 第40页 |
| ·细胞培养基 | 第40页 |
| ·蛋白鉴定培养基 | 第40-41页 |
| ·仪器和设备 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-42页 |
| ·Hela细胞在有血清培养基中贴壁培养 | 第41页 |
| ·Western blot检测Notch下游靶基因Hesl的表达 | 第41页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测融合蛋白活性 | 第41-42页 |
| ·统计学分析 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| ·Notch通路下游Hes1基因的表达检测 | 第42-43页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测hDll1~(ext)-Fc生物学活性 | 第43-45页 |
| ·pGL3-basic-hes1(promoter)质粒的构建 | 第43页 |
| ·双荧光素酶检测融合蛋白的生物学活性 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 发表论文 | 第52页 |
