| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表(Abbreviations) | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-41页 |
| ·柑橘衰退病的发生及危害 | 第13-14页 |
| ·CTV的生物学特性 | 第14-17页 |
| ·CTV的寄主范围 | 第14-15页 |
| ·CTV的症状表现与株系划分 | 第15-16页 |
| ·CTV的扩散和传播 | 第16-17页 |
| ·CTV的分子生物学特性 | 第17-23页 |
| ·CTV的诊断技术 | 第23页 |
| ·病毒对寄主基因表达的影响 | 第23-25页 |
| ·分离差异表达基因的方法 | 第25-30页 |
| ·mRNA差异显示 | 第26-27页 |
| ·基因表达系列分析 | 第27页 |
| ·抑制差减杂交 | 第27-29页 |
| ·基因芯片技术 | 第29页 |
| ·RNA sequencing | 第29-30页 |
| ·病毒与寄主的蛋白质互作 | 第30-34页 |
| ·蛋白质互作筛选方法 | 第34-38页 |
| ·酵母双杂交 | 第34-36页 |
| ·免疫共沉淀 | 第36页 |
| ·Pull-down | 第36-37页 |
| ·双分子荧光互补 | 第37-38页 |
| ·蛋白质芯片 | 第38页 |
| ·蛋白质互作预测 | 第38-39页 |
| ·此研究课题的目的与意义 | 第39-41页 |
| 第二章 CTV强毒株系N21诱导墨西哥梾檬差异表达基因的筛选 | 第41-75页 |
| ·前言 | 第41-42页 |
| ·材料与方法 | 第42-57页 |
| ·植物材料 | 第42-43页 |
| ·试验中用到的主要试剂及试剂盒 | 第43页 |
| ·墨西哥株檬总RNA的提取 | 第43页 |
| ·mRNA的分离 | 第43-45页 |
| ·差减文库的构建 | 第45-52页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第45-46页 |
| ·Rsa I酶切及接头连接 | 第46-48页 |
| ·两轮杂交反应 | 第48-50页 |
| ·两轮抑制性PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·PCR产物的回收及连接 | 第51页 |
| ·差减效率的评价 | 第51-52页 |
| ·差减文库克隆的筛选 | 第52-54页 |
| ·EST片段的PCR扩增 | 第52页 |
| ·PCR产物在尼龙膜上的固定 | 第52-53页 |
| ·放射性同位素(α-32P)标记探针的制备 | 第53-54页 |
| ·预杂交及杂交 | 第54页 |
| ·洗膜及显影 | 第54页 |
| ·差异表达EST克隆的筛选 | 第54页 |
| ·差异表达EST片段的荧光定量PCR验证 | 第54-57页 |
| ·Tester及Driver样品总RNA的提取 | 第54页 |
| ·总RNA的DNase I消化 | 第54-55页 |
| ·cDNA的合成 | 第55页 |
| ·荧光定量PCR扩增 | 第55-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-72页 |
| ·差减文库的构建 | 第57-63页 |
| ·Tester和Driver样品总RNA的分离及质量检测 | 第57-58页 |
| ·mRNA的分离及质量检测 | 第58-59页 |
| ·cDNA合成及酶切效果检测 | 第59页 |
| ·接头连接效率检测 | 第59-61页 |
| ·两轮抑制性PCR扩增 | 第61-62页 |
| ·PCR产物的回收及连接 | 第62页 |
| ·差减效率的评价 | 第62-63页 |
| ·差异表达EST片段的筛选 | 第63-67页 |
| ·差减文库插入片段的PCR扩增 | 第63-64页 |
| ·未差减cDNA探针反向Southern杂交结果 | 第64-65页 |
| ·差减cDNA探针反向Southern杂交结果 | 第65-67页 |
| ·差异表达EST片段的序列同源性比对及生物学功能分析 | 第67-68页 |
| ·差异表达EST片段的qRT-PCR验证 | 第68-69页 |
| ·不同CTV分离物诱导寄主差异表达基因的比较 | 第69-71页 |
| ·差异表达基因编码蛋白的互作预测 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 第三章 CTV-N21诱导墨西哥株檬差异表达基因的时间及空间表达分析 | 第75-84页 |
| ·前言 | 第75-76页 |
| ·材料与方法 | 第76-79页 |
| ·植物材料 | 第76-77页 |
| ·试验用到的主要试剂及试剂盒 | 第77页 |
| ·总RNA的提取 | 第77页 |
| ·总RNA的DNase I消化及cDNA的合成 | 第77页 |
| ·寄主基因的相对定量 | 第77-79页 |
| ·结果与分析 | 第79-82页 |
| ·防御及抗逆相关基因的时空表达动态 | 第79-81页 |
| ·能量代谢相关基因的时空表达动态 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第四章 CTV-N21与墨西哥株檬及枳壳互作蛋白的筛选与鉴定 | 第84-114页 |
| ·前言 | 第84-85页 |
| ·材料与方法 | 第85-100页 |
| ·植物材料 | 第85-86页 |
| ·试验用到的主要试剂及试剂盒 | 第86页 |
| ·CTV-N21病毒蛋白钓饵载体的构建 | 第86-88页 |
| ·CTV-N21基因的克隆 | 第86-87页 |
| ·病毒蛋白钓饵的自激活和毒性测试 | 第87-88页 |
| ·墨西哥株檬及枳壳cDNA酵母文库的构建 | 第88-95页 |
| ·总RNA的提取及mRNA的纯化 | 第89-90页 |
| ·墨西哥株檬及枳壳mRNA的RT-rPCR扩增 | 第90-93页 |
| ·RT-rPCR扩增产物与载体的同源重组 | 第93-95页 |
| ·酵母双杂交 | 第95页 |
| ·质粒拯救 | 第95页 |
| ·寄主互作蛋白编码基因的RACE全长扩增 | 第95-98页 |
| ·寄主候选互作蛋白编码基因的序列分析 | 第98页 |
| ·候选互作蛋白的酵母双杂交验证 | 第98-99页 |
| ·互作蛋白的双分子荧光标记(BiFC)验证 | 第99-100页 |
| ·荧光标记载体的构建 | 第99页 |
| ·农杆菌介导转化本氏烟 | 第99-100页 |
| ·寄主及病毒基因的瞬时表达 | 第100页 |
| ·转化烟草细胞的荧光观察 | 第100页 |
| ·结果与分析 | 第100-112页 |
| ·病毒钓饵载体的构建 | 第100-101页 |
| ·墨西哥梾檬及枳壳cDNA质粒文库的构建 | 第101-102页 |
| ·总RNA的提取及mRNA的纯化 | 第101-102页 |
| ·mRNA的RT-rPCR扩增 | 第102页 |
| ·互作蛋白的酵母双杂交筛选及验证 | 第102-108页 |
| ·病毒与寄主互作蛋白的酵母双杂交筛选 | 第102-104页 |
| ·寄主候选基因BD及AD载体的构建 | 第104页 |
| ·病毒与寄主互作蛋白的酵母双杂交验证 | 第104-105页 |
| ·互作蛋白编码基因的生物信息学分析 | 第105-108页 |
| ·互作蛋白的BiFC验证 | 第108-112页 |
| ·病毒及寄主基因的BiFC载体构建 | 第108页 |
| ·病毒及寄主基因瞬时表达的RT-PCR检测 | 第108-109页 |
| ·BiFC荧光观察 | 第109-112页 |
| ·讨论 | 第112-114页 |
| 第五章 结论与展望 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-136页 |
| 附录1 抑制差减杂交所用接头和引物 | 第136-137页 |
| 附录2 pSPYNE和pSPYCE载体信息 | 第137-138页 |
| 附录3 pGBKT7的限制性酶切图谱及多克隆位点 | 第138-139页 |
| 附录4 pGADT7的限制性酶切图谱及多克隆位点 | 第139-140页 |
| 附录5.差减文库中上调及下调表达基因的功能分类 | 第140-171页 |
| 附录6.CTV强毒及弱毒株系在不同寄主上诱导差异表达基因的比较 | 第171-176页 |
| 附录7 主要试剂及溶液的配制 | 第176-177页 |
| 附录8 博士期间发表的论文 | 第177-178页 |
| 致谢 | 第178页 |
