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侵染嗜水小核菌(Sclerotium hydrophilum)的双链RNA病毒研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
缩略词表第11-12页
目录第12-14页
第一章 绪论第14-28页
   ·dsRNA 病毒研究进展第14-22页
     ·dsRNA 真菌病毒及其相关的生物学影响第17-18页
     ·真菌 dsRNA 病毒侵染寄主以及其传播复制的方式第18-19页
     ·双分病毒科(Partitiviridea)病毒研究进展第19-22页
       ·双分病毒科病毒的特征及其分类现状第19-20页
       ·双分病毒科病毒的三分体现象第20-21页
       ·双分病毒科病毒生物学影响及研究展望第21-22页
   ·水稻纹枯病的研究进展第22-24页
     ·水稻纹枯病病原菌及其危害的研究第22页
     ·嗜水小核菌(Sclerotium hydrophilum)的研究第22-23页
     ·水稻纹枯病的防治与展望第23-24页
   ·dsRNA 的检测及克隆方法第24-26页
     ·dsRNA 的检测第24-25页
     ·获得 dsRNA 病毒全基因组序列的方法第25-26页
       ·随机引物 cDNA 文库克隆法第25页
       ·单引物扩增法第25-26页
       ·同源引物克隆法第26页
   ·研究背景、目的和内容第26-28页
     ·研究背景与目的第26-27页
     ·研究内容第27-28页
第二章 与水稻纹枯病类似症状相关病原真菌的鉴定第28-38页
   ·材料与方法第28-31页
     ·材料第28页
     ·试剂、药品及仪器第28页
     ·形态学观察第28-29页
     ·真菌的 ITS 和 18S rDNA 序列引物设计第29页
     ·采用改良的 SDS-CTAB 法提取真菌基因组第29-30页
     ·ITS 和 18S rDNA 序列扩增及测序第30-31页
   ·结果与分析第31-36页
     ·菌落形态、菌丝体形态及显微观察第31-33页
     ·ITS 及 18S rDNA 序列分析第33-36页
   ·小结与讨论第36-38页
第三章 嗜水小核菌中 dsRNA 检测、克隆与病毒性来源验证第38-62页
   ·材料与方法第38-51页
     ·实验材料第38-39页
     ·菌丝的培养与保存第39页
     ·酶与试剂第39页
     ·真菌中 dsRNA 提取第39-40页
     ·dsRNA 纯化第40页
     ·dsRNA 序列 cDNA 克隆第40-46页
       ·M-SPAT 法序列扩增第40-43页
       ·PCR 产物纯化第43页
       ·cDNA 片段连接反应第43-44页
       ·CaCl_2法制备感受态细胞第44页
       ·重组质粒转化第44页
       ·重组质粒的筛选第44-45页
       ·碱法制备重组质粒 DNA第45页
       ·重组质粒酶切鉴定第45-46页
     ·序列测定第46页
     ·病毒粒子提取及电镜观察第46页
     ·从病毒粒子样品中提取基因组第46-47页
     ·SDS-PAGE 检测病毒粒子蛋白第47页
     ·病毒基因组 Northern 杂交验证第47-50页
       ·病毒基因组样品的电泳以及转膜第48-49页
       ·预杂交第49页
       ·生物素标记的 DNA 探针制备第49页
       ·杂交与洗膜第49-50页
     ·病毒基因组的 RT-PCR 检测及 DNA 探针的模板制备第50-51页
       ·cDNA 第一条链的合成第50-51页
       ·PCR 反应第51页
   ·结果与分析第51-61页
     ·菌丝中的 dsRNA 的纯化第51-52页
     ·dsRNA 的回收及其 M-SPAT 结果第52-53页
     ·质粒提取与酶切鉴定第53-55页
     ·测序结果与分析第55-56页
     ·病毒粒子的提取、电镜观察及其蛋白的检测第56-58页
     ·Northern 杂交验证及 RT-PCR 验证第58-61页
   ·小结与讨论第61-62页
第四章 嗜水小核菌病毒基因组结构及功能分析第62-90页
   ·主要分析软件及分析方法第62页
   ·结果与分析第62-81页
     ·10 条病毒基因组 cDNA 序列的总分析第62-66页
     ·4 种病毒基因组构成的分类分析第66-81页
       ·基因组 ShV1R1 和 ShV1R2 组成的 ShV1第66-69页
       ·基因组 ShV2R1、ShV2R2 和 ShV2R3 组成的 ShV2第69-73页
       ·基因组 ShV3R1、ShV3R2 和 ShV3R3 组成的 ShV3第73-76页
       ·基因组 ShV4R1 和 ShV4R2 组成的 ShV4第76-81页
   ·病毒 ShV1/ShV2/ShV3/ShV4 分类的总结与讨论第81-90页
总结与展望第90-92页
参考文献第92-99页
附录:重要溶剂配制第99-102页
致谢第102-103页
攻读学位期间的研究成果第103页

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