| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| ·微生物修复环境重金属污染 | 第12-14页 |
| ·目的菌 | 第13页 |
| ·靶蛋白 | 第13-14页 |
| ·工程菌构建策略 | 第14页 |
| ·金属硫蛋白的研究进展 | 第14-20页 |
| ·金属硫蛋白的结构 | 第15页 |
| ·金属硫蛋白的分类 | 第15-16页 |
| ·金属硫蛋白的生物学功能 | 第16-17页 |
| ·金属硫蛋白在重金属吸附方面的应用 | 第17-20页 |
| ·生物吸附重金属过程中的影响因素 | 第20-23页 |
| ·pH | 第21页 |
| ·温度 | 第21-22页 |
| ·初始重金属浓度和生物吸附剂添加量 | 第22页 |
| ·吸附平衡时间 | 第22页 |
| ·共存离子 | 第22-23页 |
| ·细胞年龄 | 第23页 |
| ·其他因素 | 第23页 |
| ·本课题的研究内容及研究意义 | 第23-25页 |
| 2 金属硫蛋白多拷贝整合载体的构建及表达 | 第25-44页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第26-27页 |
| ·主要化学试剂 | 第27页 |
| ·主要实验仪器 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-35页 |
| ·酿酒酵母S. cerevisiae 4126 G418抗性分析 | 第28页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·金属硫蛋白基因多拷贝整合表达载体的构建 | 第29-34页 |
| ·S.cerevisiae 4126的转化 | 第34-35页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第35页 |
| ·实验结果和讨论 | 第35-43页 |
| ·酿酒酵母S. cerevisiae 4126 G418抗性分析 | 第35页 |
| ·金属硫蛋白多拷贝整合表达载体的设计及克隆结果 | 第35-42页 |
| ·S. cerevisiae 4126的转化及重组菌的鉴定 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 3 基因工程菌的耐受性和吸附性能考察 | 第44-60页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·实验材料与仪器 | 第44-46页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·常用实验设备 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·分析方法 | 第46页 |
| ·基因工程菌对各种重金属的耐受能力考察 | 第46-47页 |
| ·基因工程菌对Cu(Ⅱ)和Cr(Ⅵ)的吸附能力 | 第47页 |
| ·吸附平衡后胞内外金属含量的确定 | 第47-48页 |
| ·傅立叶变换红外光谱(FTIR)分析 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-60页 |
| ·基因工程菌对Cu(Ⅱ)和Cr(Ⅵ)的耐受性测定 | 第48-49页 |
| ·基因工程菌对Cu(Ⅱ)和Cr(Ⅵ)的吸附能力测定 | 第49-54页 |
| ·吸附平衡后胞内外金属含量的确定 | 第54-56页 |
| ·傅立叶变换红外光谱(FTIR)分析结果 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 4 基因工程菌对于Cu(Ⅱ)和Cr(Ⅵ)吸附的等温吸附模型研究 | 第60-68页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·实验材料与仪器 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| ·常用实验设备 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·分析方法 | 第60页 |
| ·Cu(Ⅱ)吸附实验 | 第60-61页 |
| ·Cr(Ⅵ)吸附实验 | 第61页 |
| ·Langmuir等温吸附模型 | 第61页 |
| ·Frenundlich等温吸附模型 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-68页 |
| ·工程菌对Cu(Ⅱ)等温吸附模型的研究 | 第61-64页 |
| ·程菌对Cr(Ⅵ)等温吸附模型的研究 | 第64-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 5 响应面法优化金属硫蛋白转基因酵母对Cr(Ⅵ)的还原条件 | 第68-77页 |
| ·引言 | 第68页 |
| ·实验材料与仪器 | 第68页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·常用实验设备 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-70页 |
| ·Cr(Ⅵ)和总铬分析方法 | 第68-69页 |
| ·吸附实验 | 第69页 |
| ·优化实验设计 | 第69-70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-77页 |
| ·模型建立及方差分析 | 第70-71页 |
| ·响应面分析 | 第71-74页 |
| ·各因素对Cr(Ⅵ)去除率的影响 | 第74-75页 |
| ·模型优化和验证实验 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 6 响应面法优化金属硫蛋白转基因酵母对Cu(Ⅱ)的吸附条件及等温模型研究 | 第77-84页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·实验材料与仪器 | 第77页 |
| ·实验材料 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77页 |
| ·常用实验设备 | 第77页 |
| ·主要试剂 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-78页 |
| ·Cu(Ⅱ)分析方法 | 第77页 |
| ·吸附实验 | 第77-78页 |
| ·优化实验设计 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-84页 |
| ·模型建立及方差分析 | 第78-80页 |
| ·响应面分析 | 第80-82页 |
| ·模型优化和验证实验 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 附录A 自身携带启动子的金属硫蛋白基因pcup1序列 | 第94-95页 |
| 附录B 金属硫蛋白基因cup1序列 | 第95-96页 |
| 附录C pgk启动子基因序列 | 第96-97页 |
| 附录D 载体中rDNA基因序列 | 第97-99页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
