| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·miRNA的生物发生 | 第13-16页 |
| ·miRNA生物发生过程 | 第14-15页 |
| ·与miRNA合成相关的蛋白 | 第15-16页 |
| ·植物miRNA的作用机制 | 第16页 |
| ·miRNA的特性及鉴定 | 第16-21页 |
| ·miRNA的一般特征 | 第16-17页 |
| ·植物miRNA的分离 | 第17-18页 |
| ·直接克隆法 | 第17页 |
| ·遗传学方法 | 第17页 |
| ·生物信息学方法 | 第17-18页 |
| ·miRNA靶基因的预测 | 第18-21页 |
| ·生物信息学方法 | 第18-20页 |
| ·生物学实验方法 | 第20页 |
| ·miRNA靶基因的验证方法 | 第20-21页 |
| ·miRNA的功能 | 第21-23页 |
| ·植物miRNA的靶基因 | 第21页 |
| ·调控植物生长发育 | 第21-23页 |
| ·miRNA与病毒侵染 | 第23页 |
| ·本研究的意义 | 第23-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·基因的克隆 | 第24-26页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·植物叶片基因组提取(CTAB法) | 第25-26页 |
| ·目的基因的克隆 | 第26页 |
| ·载体构建 | 第26-30页 |
| ·目的片断的酶切 | 第26-27页 |
| ·目的片段的切胶回收 | 第27页 |
| ·目的片段的连接 | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第28-29页 |
| ·DNA序列测定 | 第29页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·试剂盒纯化质粒 | 第29-30页 |
| ·碱裂解法粗提质粒 | 第30页 |
| ·遗传转化 | 第30-31页 |
| ·菌株及载体 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第31页 |
| ·农杆菌转化子的检测 | 第31页 |
| ·转基因植株的分子生物学检测 | 第31-35页 |
| ·简易法提取水稻叶片DNA | 第31页 |
| ·阳性植株检测 | 第31-32页 |
| ·水稻总RNA的提取(Trizol法) | 第32页 |
| ·去除RNA中的基因组DNA | 第32-33页 |
| ·反转录合成cDNA | 第33-34页 |
| ·半定量PCR | 第34页 |
| ·qPCR | 第34-35页 |
| ·饲毒与接毒 | 第35页 |
| ·ELISA检测 | 第35-36页 |
| ·Alexander花粉染色 | 第36-37页 |
| 第3章 表达载体的构建及对水稻的遗传转化和检测 | 第37-63页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·基因的克隆 | 第37页 |
| ·over-lapping PCR获得功能抑制片段 | 第37页 |
| ·载体的构建 | 第37-38页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第38-39页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第38页 |
| ·菌液的准备 | 第38页 |
| ·愈伤组织与农杆菌的共培养 | 第38页 |
| ·抗性愈伤的筛选与分化 | 第38页 |
| ·生根壮苗和移载 | 第38-39页 |
| ·转基因水稻苗的阳性检测 | 第39-60页 |
| ·qPCR检测 | 第58-60页 |
| ·RNA的提取及cDNA的合成 | 第58页 |
| ·半定量PCR | 第58-59页 |
| ·目的基因的qPCR | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| 第5章 结论和进一步研究建议 | 第63-64页 |
| ·结论 | 第63页 |
| ·进一步的研究建议 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录一 缩写说明 | 第69-70页 |
| 附录二 主要试剂及配方 | 第70-73页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |