| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| 1 生物膜 | 第11-16页 |
| ·细菌形成生物膜的生存优势 | 第11页 |
| ·细菌形成生物膜的过程 | 第11-13页 |
| ·生物膜的形成条件 | 第13-14页 |
| ·生物膜之间细胞的相互联系 | 第14-15页 |
| ·生物膜的解离 | 第15-16页 |
| 2 毒素-抗毒素(Toxin-Antitoxin)系统 | 第16-24页 |
| ·大肠杆菌TA系统功能的几种假设 | 第17-19页 |
| ·毒素抗毒系统引起的细胞程序性死亡 | 第19-24页 |
| 3 大肠杆菌毒素-抗毒系统与生物膜形成的关系 | 第24-25页 |
| 4 hipBA基因 | 第25-29页 |
| 5. 本论文的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 实验部分 | 第30-62页 |
| 1 实验材料 | 第30-35页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·质粒 | 第30页 |
| ·常用试剂盒 | 第30页 |
| ·常用试剂以及酶类 | 第30-31页 |
| ·仪器与设备 | 第31-32页 |
| ·培养基及主要试剂配制 | 第32-35页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·各种抗生素的使用浓度 | 第33-34页 |
| ·常用溶液 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-45页 |
| ·构建过表达载体以及hip基因敲除菌株 | 第35-40页 |
| ·pBAD-hipA重组质粒的构建 | 第35-39页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增hipA基因 | 第36页 |
| ·PCR产物的纯化(胶回收法) | 第36-37页 |
| ·载体质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·双酶切反应和连接反应 | 第38页 |
| ·酶切产物的分离与纯化 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(CaCl_2转化法) | 第38-39页 |
| ·质粒在大肠杆菌的转化 | 第39页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第39页 |
| ·hipBA基因的敲除 | 第39-40页 |
| ·生物膜的培养条件 | 第40-45页 |
| ·96孔酶标板静置状态条件下生物膜的形成 | 第40页 |
| ·生物膜在普通盖玻片上的形成 | 第40-41页 |
| ·定量测定生物膜的形成 | 第41页 |
| ·荧光显微镜下观察静置状态下生物膜生长情况 | 第41-42页 |
| ·DNaseⅠ形成的生物膜的影响 | 第42页 |
| ·96孔板法 | 第42页 |
| ·盖玻片法 | 第42页 |
| ·细胞外DNA的分离 | 第42-43页 |
| ·流动状态下的生物膜形成 | 第43页 |
| ·β-半乳糖苷酶测细胞裂解程度 | 第43-44页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的测定方法 | 第44页 |
| ·HipA的过量表达对菌体存活的影响 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-59页 |
| ·生物膜的培养条件的选择 | 第45-48页 |
| ·96孔板静态条件下生物膜生长条件的选择 | 第45-46页 |
| ·生物膜在静止状态下在盖玻片上的形成 | 第46-47页 |
| ·Flow Chamber中生物膜的形成 | 第47-48页 |
| ·hip基因与BW25113生物膜形成关系 | 第48-59页 |
| ·载有hipA基因的重组质粒的构建和检测 | 第48-49页 |
| ·hipBA基因的敲除 | 第49-50页 |
| ·96孔板静态条件下的生物膜的形成 | 第50-51页 |
| ·生物膜在静止状态下在盖玻片上的形成 | 第51-52页 |
| ·Flow Chamber中生物膜的形成 | 第52-53页 |
| ·生物膜中胞外DNA的提取 | 第53-55页 |
| ·DNaseⅠ对生物膜的影响 | 第55-57页 |
| ·β-半乳糖苷酶测细胞裂解程度 | 第57-58页 |
| ·HipA过量表达对菌体生长的影响 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 全文总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第71页 |