柑橘溃疡病菌重组单链抗体研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 1 绪论 | 第15-43页 |
| ·抗体简介 | 第15-29页 |
| ·抗体的基本结构 | 第15-16页 |
| ·单链抗体基因的构建 | 第16-17页 |
| ·抗体基因库技术 | 第17-25页 |
| ·单链抗体的表达 | 第25-27页 |
| ·抗体的纯化 | 第27页 |
| ·单链抗体存在问题及改进方法 | 第27-29页 |
| ·柑橘溃疡病菌简介 | 第29-37页 |
| ·柑桔溃疡病的发生与危害 | 第29-31页 |
| ·柑桔溃疡病菌的菌系与分类研究 | 第31-32页 |
| ·柑桔溃疡病菌的基因组研究 | 第32-33页 |
| ·柑桔溃疡病菌的检疫检验技术 | 第33-35页 |
| ·病害根除计划与检疫除害 | 第35-37页 |
| ·立题依据 | 第37-39页 |
| ·本研究的目标和内容 | 第39-40页 |
| ·整体设计思路 | 第40-41页 |
| ·创新之处 | 第41-43页 |
| 2 单链抗体文库的构建 | 第43-61页 |
| ·技术路线 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·免疫小鼠 | 第45-46页 |
| ·小鼠抗血清效价测定 | 第46页 |
| ·分离小鼠脾细胞 | 第46页 |
| ·脾细胞mRNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·VH, VL 及linker 的扩增 | 第47-50页 |
| ·单链抗体文库质量的评价 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-57页 |
| ·小鼠免疫 | 第51-52页 |
| ·脾细胞mRNA 质量测定 | 第52页 |
| ·RT-PCR 扩增 VH、VL | 第52-53页 |
| ·linker 的扩增 | 第53-54页 |
| ·VH, VL 及linker 片段的连接 | 第54页 |
| ·单链抗体文库质量评价 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-61页 |
| ·免疫小鼠 | 第57页 |
| ·mRNA 的提取 | 第57-58页 |
| ·单链抗体文库重链和轻链的扩增 | 第58-59页 |
| ·重链和轻链的连接 | 第59-61页 |
| 3 核糖体展示 | 第61-71页 |
| ·技术路线 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·柑橘溃疡病菌脂多糖的提取 | 第62-63页 |
| ·O 特异性多糖侧链的制备 | 第63页 |
| ·体外转录、翻译及筛选 | 第63-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-67页 |
| ·柑橘溃疡病菌O 多糖侧链制备 | 第64-65页 |
| ·体外转录 | 第65页 |
| ·体外翻译 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-71页 |
| ·离体转录和翻译 | 第67-68页 |
| ·亲和筛选及筛选效率的评价 | 第68-70页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第70-71页 |
| 4 单链抗体的克隆及筛选 | 第71-89页 |
| ·技术路线 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71-74页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71-74页 |
| ·实验方法 | 第74-78页 |
| ·筛选后单链抗体库DNA 的扩增 | 第74-75页 |
| ·全套ScFv 基因的克隆 | 第75-76页 |
| ·ELISA 筛选抗原阳性的单链抗体 | 第76-77页 |
| ·Biacore 筛选高亲和力单链抗体 | 第77-78页 |
| ·结果与分析 | 第78-84页 |
| ·阳性克隆子验证 | 第78-79页 |
| ·单链抗体小量表达 | 第79-80页 |
| ·抗原阳性克隆子的筛选 | 第80-82页 |
| ·Biacore 筛选高亲和力抗体 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-89页 |
| ·ELISA 初筛抗原阳性单链抗体 | 第84-85页 |
| ·Biacore 筛选高亲和力单链抗体 | 第85-89页 |
| 5 单链抗体的表达及特性研究 | 第89-111页 |
| ·技术路线 | 第89页 |
| ·实验材料 | 第89-91页 |
| ·主要仪器 | 第89-90页 |
| ·主要试剂 | 第90-91页 |
| ·实验方法 | 第91-95页 |
| ·噬菌体感染HB2152 | 第91-92页 |
| ·单链抗体的可溶性表达 | 第92页 |
| ·可溶性表达产物的检测 | 第92-93页 |
| ·表达产物的纯化 | 第93页 |
| ·ELISA 测定单链抗体专一性 | 第93页 |
| ·Biacore 分析单链抗体专一性 | 第93-94页 |
| ·单链抗体亲和力测定 | 第94-95页 |
| ·序列测定及分析 | 第95页 |
| ·结果与分析 | 第95-105页 |
| ·可溶性表达 | 第95-96页 |
| ·单链抗体的纯化 | 第96-99页 |
| ·Western blot | 第99-100页 |
| ·可溶性抗体生物活性检测 | 第100页 |
| ·单链抗体专一性分析 | 第100-103页 |
| ·Biacore 分析单链抗体亲和力 | 第103-104页 |
| ·单链抗体序列分析 | 第104-105页 |
| ·讨论 | 第105-111页 |
| ·单链抗体的表达 | 第105-107页 |
| ·单链抗体的鉴定与纯化 | 第107-108页 |
| ·抗体特性研究及序列分析 | 第108-111页 |
| 6 主要研究结论及后续研究建议 | 第111-113页 |
| ·主要研究结论 | 第111页 |
| ·后续工作建议 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-129页 |
| 附录 | 第129页 |
