| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 小麦白粉病的危害 | 第9页 |
| 1.2 小麦抗白粉病基因发掘及应用进展 | 第9-10页 |
| 1.2.1 小麦抗白粉基因的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2.2 小麦亲缘种属抗白粉病基因及育种应用 | 第10页 |
| 1.3 小麦近缘物种优异基因向小麦转移的方法与研究进展 | 第10-12页 |
| 1.3.1 利用组织培养诱导染色体结构变异 | 第11页 |
| 1.3.2 利用Ph1突变体或5B缺失诱导染色体结构变异 | 第11页 |
| 1.3.3 利用电离辐射诱导染色体结构变异 | 第11-12页 |
| 1.3.4 利用杀配子染色体诱导染色体结构变异 | 第12页 |
| 1.4 普通小麦背景中外源染色体的鉴定 | 第12-13页 |
| 1.4.1 原位杂交鉴定小麦中的外源染色体 | 第12页 |
| 1.4.2 分子标记鉴定小麦中的外源染色体 | 第12-13页 |
| 1.5 小麦抗病基因的克隆 | 第13-16页 |
| 1.5.1 小麦抗病基因图位克隆的原理与进展 | 第13-14页 |
| 1.5.2 MutChromseq法快速定位克隆小麦未知基因 | 第14-15页 |
| 1.5.3 MutRenSeq法快速定位克隆小麦未知基因 | 第15-16页 |
| 1.6 大麦条纹花叶病毒诱导的基因沉默技术 | 第16-17页 |
| 1.6.1 病毒诱导基因沉默的技术原理 | 第16-17页 |
| 1.6.2 VIGS病毒载体的选取 | 第17页 |
| 1.6.3 BSMV-VIGS的应用 | 第17页 |
| 1.7 本研究的目的和意义及技术路线 | 第17-18页 |
| 1.7.1 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 供试小麦 | 第18-19页 |
| 2.1.2 供试白粉菌 | 第19页 |
| 2.1.3 质粒载体、菌株 | 第19-20页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第20页 |
| 2.1.5 主要溶液的配置 | 第20-21页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 白粉病抗性鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.2 小麦DNA、RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2.1 小麦基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 小麦总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.2.3 cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.2.3 分子标记设计开发 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PCR反应体系与条件 | 第24-26页 |
| 2.2.5 2S~s#1特异分子标记物理定位 | 第26页 |
| 2.2.6 Pm57小片段易位系创制与基因定位 | 第26-27页 |
| 2.2.6.1 利用ph1b基因构建Pm57小片段易位系 | 第26页 |
| 2.2.6.2 F_2分离重组群体苗期白粉病抗性鉴定 | 第26页 |
| 2.2.6.3 F_2分离重组群体2S~s特异分子标记鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.7 Pm57抗性丧失突变体的筛选与抗病基因富集测序 | 第27-28页 |
| 2.2.7.1 EMS诱变处理 | 第27页 |
| 2.2.7.2 M_2株系白粉病抗性鉴定 | 第27页 |
| 2.2.7.3 M_2感病突变体真实性分子标记鉴定 | 第27页 |
| 2.2.7.4 Pm57抗性丧失突变体抗病基因富集测序 | 第27-28页 |
| 2.2.8 Pm57候选基因发掘 | 第28页 |
| 2.2.8.1 转录组测序预测Pm57候选基因 | 第28页 |
| 2.2.8.2 染色体共线性预测Pm57候选基因 | 第28页 |
| 2.2.8.3 抗病基因富集测序预测Pm57候选基因 | 第28页 |
| 2.2.9 用BSMV-VIGS验证Pm57候选基因 | 第28-31页 |
| 2.2.9.1 根据目标基因构建VIGS载体 | 第29-30页 |
| 2.2.9.2 VIGS载体线性化 | 第30页 |
| 2.2.9.3 体外转录 | 第30-31页 |
| 2.2.9.4 材料培养和病毒接种 | 第31页 |
| 2.2.9.5 白粉病抗性鉴定 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-50页 |
| 3.1 白粉病诱导后2S~s特异表达基因GO和KEGG注释 | 第31-33页 |
| 3.2 2S~s#1特异分子标记开发与染色体区段定位 | 第33-35页 |
| 3.3 Pm57基因紧密连锁分子标记特异性和通用性分析 | 第35-36页 |
| 3.4 Pm57基因的精细定位 | 第36-39页 |
| 3.5 Pm57抗性丧失突变体筛选与抗病基因富集测序 | 第39-41页 |
| 3.5.1 Pm57抗性丧失突变体筛选 | 第39-40页 |
| 3.5.2 抗病基因富集测序 | 第40-41页 |
| 3.6 Pm57候选基因发掘 | 第41-45页 |
| 3.6.1 转录组测序预测候选基因 | 第41页 |
| 3.6.2 共线性分析预测候选基因 | 第41-42页 |
| 3.6.3 抗病基因富集测序预测候选基因 | 第42-45页 |
| 3.7 Pm57候选基因的VIGS功能验证 | 第45-50页 |
| 3.7.1 同源重组法构建VIGS沉默载体 | 第45-46页 |
| 3.7.2 体外转录与病毒接种观察 | 第46-47页 |
| 3.7.3 白粉病接种及考马斯亮蓝染色观察 | 第47-49页 |
| 3.7.4 基因表达水平及同源比对 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 2S~s#1特异分子标记开发与物理定位 | 第50页 |
| 4.2 Pm57精细定位 | 第50-51页 |
| 4.3 抗病基因富集测序挖掘候选基因 | 第51-52页 |
| 4.4 Pm57候选基因 | 第52页 |
| 4.5 大麦条纹花叶病毒诱导的基因沉默技术验证候选基因 | 第52-53页 |
| 全文结论 | 第53-54页 |
| 附表1 2S~s#1特异分子标记 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 英文摘要 | 第63-65页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第65页 |
