| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-54页 |
| 一 干细胞简介 | 第14-15页 |
| 1 干细胞的定义及特征 | 第14页 |
| 2 干细胞的分类 | 第14-15页 |
| ·根据潜能划分 | 第14页 |
| ·根据来源划分 | 第14-15页 |
| 二 精原干细胞简介 | 第15-18页 |
| 1 简介与历史回顾 | 第15-16页 |
| ·定义 | 第15页 |
| ·形态特征 | 第15-16页 |
| 2 精原干细胞的增殖分化过程 | 第16-18页 |
| ·起源 | 第16页 |
| ·SSCs的增殖、分化及细胞周期 | 第16-17页 |
| ·SSCs与精子发生 | 第17-18页 |
| 3 总结 | 第18页 |
| 三 精原干细胞移植技术的研究进展 | 第18-33页 |
| 1 精原干细胞移植技术的发展历程 | 第18-23页 |
| ·SSCs同种移植 | 第18-19页 |
| ·SSCs异种/源移植 | 第19-20页 |
| ·大鼠-小鼠SSCs异种移植 | 第20页 |
| ·仓鼠-小鼠、狗-小鼠和兔-小鼠间的SSCs异种移植 | 第20页 |
| ·牛、羊、猴和人的睾丸注射 | 第20-21页 |
| ·SSCs冷冻保存后的移植 | 第21页 |
| ·体外培养的SSCs移植 | 第21-23页 |
| 2 移植方法 | 第23-28页 |
| ·供体的选择 | 第23页 |
| ·受体的准备 | 第23-24页 |
| ·精原干细胞的移植方法 | 第24-26页 |
| ·曲细精管注射法 | 第24-25页 |
| ·睾丸输出管注射法 | 第25页 |
| ·睾丸网注射法 | 第25-26页 |
| ·精原干细胞移植后的评价 | 第26-27页 |
| ·影响SSCs移植效率的因素 | 第27-28页 |
| ·供体细胞的数量和密度 | 第28页 |
| ·SSCs富集提高移植效率 | 第28页 |
| 3 精原干细胞移植的研究和应用前景 | 第28-32页 |
| ·物种保护和男性育性恢复 | 第28-29页 |
| ·SSCs体外培养的功能性评价系统 | 第29页 |
| ·SSCs的分离与鉴定 | 第29页 |
| ·不育及基因敲除研究 | 第29-30页 |
| ·精子发生机理研究 | 第30-31页 |
| ·遗传病的基因治疗 | 第31页 |
| ·用SSC移植技术制作转基因动物 | 第31-32页 |
| 4 精原干细胞移植潜在的问题 | 第32-33页 |
| 四 移植SSCS在受体睾丸中的克隆及其分化过程 | 第33-34页 |
| 五 精原干细胞体内增殖分化的影响因素 | 第34-41页 |
| 1 胶质细胞源性神经营养因子的调控作用 | 第35页 |
| 2 干细胞因子和集落刺激因子的调控作用 | 第35-36页 |
| 3 其它生长因子的调控作用 | 第36页 |
| 4 激素水平的调节 | 第36-41页 |
| ·FSH和睾酮的生理作用 | 第36-37页 |
| ·FSH和睾酮的调节者GnRH | 第37-41页 |
| ·GnRH的结构及其分布 | 第38-39页 |
| ·GnRH的生物学功能 | 第39-41页 |
| ·在垂体水平的功能 | 第40-41页 |
| ·在性腺水平的功能 | 第41页 |
| 六 促激素释放激素类似物 | 第41-43页 |
| 1 GNRH类似物的分子特点 | 第41-42页 |
| 2 GnRH类似物的作用 | 第42页 |
| 3 GnRH类似物亮丙瑞林 | 第42-43页 |
| ·亮丙瑞林简介 | 第42-43页 |
| ·亮丙瑞林在精原干细胞移植上的应用 | 第43页 |
| 七 绿色荧光蛋白及其应用的研究进展 | 第43-48页 |
| 1 GFP结构、生化特性、发光机制 | 第44-45页 |
| ·GFP结构特点 | 第44页 |
| ·生化特性 | 第44页 |
| ·GFP的发光机制 | 第44-45页 |
| 2 GFP的应用 | 第45-48页 |
| ·作为报告基因构建基因工程载体 | 第45页 |
| ·作为动物的筛选标记 | 第45-46页 |
| ·作为目的基因的功能研究 | 第46页 |
| ·作为病原体与宿主关系的研究 | 第46页 |
| ·GFP在生态学中的应用 | 第46页 |
| ·GFP在干细胞移植中的应用 | 第46-48页 |
| ·监测移植干细胞在体内的分布情况 | 第47页 |
| ·定量移植干细胞在体内各组织的含量 | 第47-48页 |
| ·检测移植干细胞在体内的分化情况 | 第48页 |
| 八 干细胞表面因子的研究和β整合素的研究 | 第48-54页 |
| 1 SCF/C-kit系统与生精细胞发育、增殖和分化 | 第48-51页 |
| ·SCF/C-kit系统的生物学特性 | 第48-49页 |
| ·SCF/C-KIT系统对原始生殖细胞的作用 | 第49-50页 |
| ·SCF/C—KIT系统对生精细胞增殖、分化的影响 | 第50-51页 |
| ·SCF/GKIT系统作用机理 | 第51页 |
| 2 整合素的作用 | 第51-54页 |
| ·整合素的组成及其生物学作用 | 第51-52页 |
| ·整合素与信号传导 | 第52-53页 |
| ·整合素与生精作用 | 第53-54页 |
| 第二部分 本题的研究内容和意义 | 第54-58页 |
| 一 本题的立题依据 | 第54-55页 |
| 二 本题的实验内容 | 第55-56页 |
| 三 本题的研究目的及意义 | 第56-58页 |
| 第三部分 实验材料和方法 | 第58-70页 |
| 一 实验材料 | 第58-59页 |
| 1 主要仪器及试剂 | 第58页 |
| 2 实验动物 | 第58-59页 |
| 二 实验方法与步骤 | 第59-70页 |
| 1 实验动物准备 | 第59页 |
| 2 操作针的制备 | 第59-60页 |
| 3 供体睾丸细胞的分离与纯化 | 第60-61页 |
| ·供体睾丸细胞的分离 | 第60页 |
| ·供体睾丸细胞的纯化(差异贴壁分选) | 第60-61页 |
| 4 精原干细胞的移植:用输出管注射法进行细胞移植 | 第61-62页 |
| ·供体细胞移植时间 | 第61页 |
| ·移植方法 | 第61-62页 |
| 5 实验结果的检测 | 第62-69页 |
| ·细胞活性率的检测 | 第62页 |
| ·睾丸指数测定 | 第62-63页 |
| ·对移植后的受体睾丸组织进行荧光分析 | 第63页 |
| ·对移植后的受体睾丸组织进行组织学检测 | 第63-66页 |
| ·载玻片及盖玻片的处理 | 第63页 |
| ·冰冻切片操作步骤 | 第63-64页 |
| ·石蜡切片 | 第64-66页 |
| ·反转录PCR检测细胞因子 | 第66-69页 |
| ·试剂盒法动物组织总RNA的提取 | 第66-67页 |
| ·试剂盒法反转录cDNA第一链的合成。按Tiangen公司试剂盒说明进行 | 第67-68页 |
| ·PCR法检测细胞因子 | 第68-69页 |
| ·统计方法 | 第69-70页 |
| 第四部分 结果与分析 | 第70-83页 |
| 一 小鼠精原干细胞分离、纯化图 | 第70-71页 |
| 二 小鼠睾丸指数 | 第71-72页 |
| 三 供体细胞向受体睾丸曲细精管中的移植 | 第72-73页 |
| 四 荧光倒置显微镜下观察移植后受体睾丸的曲细精管 | 第73-77页 |
| 五 供体GFP细胞在受体小鼠曲细精管归巢、增殖和分化的石蜡切片结果 | 第77-79页 |
| 六 反转录PCR检测细胞因子 | 第79-83页 |
| 1 总RNA电泳结果 | 第79页 |
| 2 移植后各组各时期睾丸内β-actin,β1-integrin及SCFmRNA的表达情况 | 第79-83页 |
| ·细胞移植后各时期β1-integrin mRNA的表达情况 | 第80-81页 |
| ·细胞移植后各时期SCF mRNA的表达情况 | 第81-83页 |
| 第五部分 讨论 | 第83-88页 |
| 一 关于精原干细胞移植的讨论 | 第83-86页 |
| 1 供体动物的选择 | 第84页 |
| 2 关于供体精原干细胞的分离和富集 | 第84-85页 |
| 3 关于受体动物模型建立的讨论 | 第85页 |
| 4 关于精原干细胞移植结果的讨论 | 第85-86页 |
| 二 关于GnRH激动剂亮丙瑞林在细胞克隆作用上的讨论 | 第86-88页 |
| 第六部分 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-101页 |
| 附录 | 第101-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第106页 |
