| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-21页 |
| ·微生物淀粉酶简介 | 第9-14页 |
| ·米曲霉中性α-淀粉酶简介 | 第10-12页 |
| ·黑曲霉耐酸性α-淀粉酶简介 | 第12-14页 |
| ·米曲霉简介 | 第14-15页 |
| ·米曲霉表达系统研究进展 | 第15-19页 |
| ·同源蛋白在米曲霉中的表达 | 第15-16页 |
| ·使用高效启动子提高蛋白产量 | 第15-16页 |
| ·增加编码基因拷贝数提高蛋白产量 | 第16页 |
| ·超表达曲霉来源的血红蛋白结构域(HBD)提高蛋白产量 | 第16页 |
| ·异源蛋白在米曲霉中的表达 | 第16-19页 |
| ·降低米曲霉蛋白酶活性 | 第17-18页 |
| ·使用高效启动子 | 第18页 |
| ·外源蛋白基因与米曲霉自身高分泌蛋白基因重组表达 | 第18-19页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 淀粉酶产生菌的筛选及其系统进化分析 | 第21-33页 |
| ·前言 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-25页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·培养基及试剂 | 第21-22页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-25页 |
| ·淀粉酶产生菌的筛选 | 第22页 |
| ·淀粉-琼脂鉴定板法测定发酵液淀粉酶活性 | 第22-23页 |
| ·丝状真菌基因组DNA提取方法 | 第23页 |
| ·E.coli JM 109感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第23-24页 |
| ·丝状真菌18S rDNA基因的获得 | 第24页 |
| ·目的基因连接到pMD18-T载体 | 第24页 |
| ·转化E.coli JM109感受态细胞 | 第24页 |
| ·菌落PCR法验证转化子 | 第24-25页 |
| ·测序 | 第25页 |
| ·18S rDNA序列分析和系统进化树构建 | 第25页 |
| ·结果与讨论 | 第25-31页 |
| ·琼脂块法筛选淀粉酶产生菌 | 第25页 |
| ·发酵液中淀粉酶活性测定 | 第25-27页 |
| ·菌株FS160的18S rDNA基因序列的扩增 | 第27-28页 |
| ·18S rDNA基因与pMD18-T载体的连接及转化 | 第28-29页 |
| ·FS160的18S rDNA序列测定及分析 | 第29-31页 |
| ·小结 | 第31-33页 |
| 第3章 多拷贝α-淀粉酶表达盒米曲霉工程菌的构建 | 第33-53页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-42页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·菌种及载体 | 第33页 |
| ·培养基及试剂 | 第33-34页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-42页 |
| ·PCR扩增米曲霉FS1125 ITS序列和α-淀粉酶表达盒序列 | 第35页 |
| ·ITS和α-淀粉酶表达盒序列分别连接pMD18-T simple vector并测序 | 第35-36页 |
| ·重组载体pBC-hygro-IA的构建方法 | 第36-37页 |
| ·用质粒大量提取法提取pBC-hygro-IA | 第37页 |
| ·pBC-hygro-IA转化米曲霉的方法(PEG-原生质体法) | 第37-39页 |
| ·基因组PCR验证米曲霉转化子 | 第39页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第39-41页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和酶活性染色分析 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-51页 |
| ·米曲霉FS1125 ITS序列和α-淀粉酶表达盒序列的克隆及序列分析 | 第42-44页 |
| ·重组载体pBC-hygro-IA的构建 | 第44-46页 |
| ·基因组PCR法验证米曲霉阳性转化子及同核转化子的获得 | 第46-49页 |
| ·SDS-PAGE检测米曲霉FS1125和米曲霉转化子FS1125-T1 α-淀粉酶的表达 | 第49页 |
| ·Native-PAGE和活性染色分析米曲霉FS1125和米曲霉转化子FS1125-T1 α-淀粉酶活性 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第4章 米曲霉FS1125所产α-淀粉酶的活性测定及其酶学性质的初步分析 | 第53-59页 |
| ·前言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-55页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌种 | 第53页 |
| ·培养基及试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-55页 |
| ·米曲霉发酵实验 | 第54页 |
| ·中温α-淀粉酶活性测定方法 | 第54页 |
| ·α-淀粉酶最适反应pH值测定 | 第54-55页 |
| ·α-淀粉酶最适反应温度测定 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-57页 |
| ·米曲霉FS1125发酵过程中淀粉酶活性及pH值变化 | 第55页 |
| ·pH值和反应温度对米曲霉FS1125 α-淀粉酶活性的影响 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简历 | 第71-72页 |
