| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩略语说明 | 第11-14页 |
| 目录 | 第14-24页 |
| 第1章 绪论 | 第24-41页 |
| 第1节 动脉粥样硬化 | 第25-27页 |
| ·动脉粥样硬化的症状 | 第25页 |
| ·动脉粥样硬化的病理认识 | 第25-27页 |
| ·祖国医学对AS的认识 | 第25-26页 |
| ·现代医学对AS的认识 | 第26-27页 |
| 第2节 平滑肌细胞与心血管疾病 | 第27-30页 |
| ·VSMC的表型特点 | 第27-28页 |
| ·收缩表型VSMC | 第28页 |
| ·合成表型VSMC | 第28页 |
| ·VSMC的异常增殖与迁移 | 第28-29页 |
| ·多种细胞因子引起细胞增殖 | 第28-29页 |
| ·血管损伤引起细胞代偿性增殖 | 第29页 |
| ·异常增殖与迁移的实验分析方法 | 第29页 |
| ·VSMC增殖与迁移的相关基因表达的研究 | 第29-30页 |
| 第3节 天然产物功效成分与AS的关系 | 第30-41页 |
| ·当归 | 第30-33页 |
| ·当归在心血管疾病方面的作用 | 第30-31页 |
| ·当归的主要功效成分及在心血管疾病方面的作用 | 第31-33页 |
| ·女贞子 | 第33-35页 |
| ·女贞子在心血管疾病方面的应用 | 第33-34页 |
| ·女贞子的功效成分及其在心血管疾病方面的应用 | 第34-35页 |
| ·决明子 | 第35-37页 |
| ·决明子的主要化学成分 | 第35-36页 |
| ·决明子的降血脂作用 | 第36-37页 |
| ·山药 | 第37-39页 |
| ·山药的主要化学成分 | 第38页 |
| ·薯蓣皂苷元的抗动脉粥样硬化作用 | 第38-39页 |
| 第4节 | 第39-41页 |
| ·课题来源 | 第39页 |
| ·研究价值与意义 | 第39-40页 |
| ·主要研究内容 | 第40-41页 |
| 第2章 抗动脉粥样硬化细胞筛选模型的建立 | 第41-61页 |
| 第1节 体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞系的建立 | 第41-50页 |
| ·材料与方法 | 第41-45页 |
| ·材料与试剂 | 第41-42页 |
| ·人脐动脉VSMCs的体外培养 | 第42-44页 |
| ·人脐动脉VSMCs的纯化 | 第44页 |
| ·人脐动脉VSMCs的观察鉴定 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·原代培养VSMCs的生长观察 | 第45-46页 |
| ·人脐动脉VSMCs的纯化 | 第46-47页 |
| ·人脐VSMCs的形态学观察 | 第47-48页 |
| ·人脐动脉VSMCs系的建立 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49页 |
| ·人脐动脉VSMCs系的建立 | 第49页 |
| ·应同时采用多种方法纯化人脐动脉血管平滑肌细胞 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第2节 人脐动脉VSMCS增殖模型的建立 | 第50-61页 |
| ·材料与方法 | 第50-54页 |
| ·材料与试剂 | 第50-51页 |
| ·人脐动脉VSMCs的增殖培养 | 第51页 |
| ·增殖细胞的形态学观察 | 第51页 |
| ·增殖细胞相对活力的检测 | 第51-52页 |
| ·Bradford法检测细胞总蛋白含量 | 第52页 |
| ·BrdU掺入法测定细胞DNA合成 | 第52页 |
| ·增殖细胞生长曲线的测定 | 第52页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期的变化 | 第52-53页 |
| ·增殖细胞平面迁移能力测定 | 第53页 |
| ·增殖细胞粘附能力测定 | 第53页 |
| ·数据处理 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·增殖细胞族群的形态学改变 | 第54页 |
| ·增殖细胞的形态学改变 | 第54-55页 |
| ·增殖细胞总蛋白和DNA合成变化 | 第55页 |
| ·增殖细胞生长曲线的变化 | 第55页 |
| ·细胞周期的变化 | 第55-56页 |
| ·增殖细胞迁移能力的改变 | 第56-57页 |
| ·细胞粘附能力的影响 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| ·平滑肌细胞增殖是动脉粥样硬化病理特征之一 | 第58-59页 |
| ·高浓度血清培养,刺激平滑肌细胞表型改变,进入分裂增殖态 | 第59页 |
| ·高浓度血清培养VSMC,引起细胞总蛋白和DNA合成增加,增殖生长提前 | 第59页 |
| ·高浓度血清培养影响细胞周期,引起VSMCs增殖 | 第59-60页 |
| ·高浓度血清刺激VSMC增殖,并引起细胞粘附与迁移等行为的改变 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第3章 以VSMC为靶标的抗AS天然产物功效成分筛选 | 第61-91页 |
| 第1节 待筛选天然产物功效成分的抗氧化作用研究 | 第61-77页 |
| ·材料与方法 | 第62-66页 |
| ·仪器与试剂 | 第62页 |
| ·Bradford法检测样品蛋白含量 | 第62-63页 |
| ·红细胞溶血实验 | 第63页 |
| ·血清抗氧化实验 | 第63页 |
| ·大鼠肝匀浆脂质过氧化实验 | 第63-64页 |
| ·对H_2O_2-Fe~(2+)诱导的大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制实验 | 第64页 |
| ·大鼠肝线粒体脂质过氧化损伤实验 | 第64-65页 |
| ·对·OH、·O~(2-)自由基清除作用的测定 | 第65页 |
| ·DPPH自由基的清除实验 | 第65页 |
| ·还原力的测定实验 | 第65页 |
| ·蛋白结合测定实验 | 第65页 |
| ·数据处理 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-74页 |
| ·Bradford法制备蛋白标准曲线 | 第66页 |
| ·功效成分对红细胞溶血的影响 | 第66-67页 |
| ·各功效成分对诱导血清氧化的抑制作用 | 第67-68页 |
| ·功效成分抗大鼠肝匀浆自发性脂质过氧化反应 | 第68页 |
| ·功效成分抗Vit C-Fe~(2+)诱导的大鼠肝匀浆脂质过氧化反应 | 第68-69页 |
| ·功效成分对Vit_C-Fe~(2+)诱导的大鼠肝线粒体脂质过氧化损伤的影响 | 第69页 |
| ·功效成分对·OH自由基清除作用的影响 | 第69-70页 |
| ·功效成分对·O~(2-)自由基清除作用的影响 | 第70-71页 |
| ·功效成分对DPPH自由基清除作用的影响 | 第71-72页 |
| ·功效成分对铁离子的还原能力 | 第72-73页 |
| ·功效成分-蛋白结合实验结果 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| ·宜结合多种模型来评价天然产物的抗氧化作用 | 第74页 |
| ·不同分子结构的药物在不同氧化模型中的效果不同 | 第74-76页 |
| ·功效成分对红细胞溶血、血清自氧化、肝匀浆脂质过氧化以及·O~(2-)、·OH、DPPH等自由基的清除、Fe~(3+)的还原等方面的抗氧化能力表现各不相同 | 第76-77页 |
| ·小结 | 第77页 |
| 第2节 天然产物功效成分对VSMC行为的影响 | 第77-91页 |
| ·材料与方法 | 第77-79页 |
| ·材料与试剂 | 第77-78页 |
| ·人脐动脉VSMCs的增殖培养与检测 | 第78页 |
| ·细胞形态观察 | 第78页 |
| ·台盼蓝染色检测细胞成活率 | 第78页 |
| ·MTT比色法检测细胞相对活力 | 第78-79页 |
| ·Bradford法检测细胞总蛋白含量 | 第79页 |
| ·BrdU掺入法测定细胞DNA合成 | 第79页 |
| ·对细胞生长曲线的影响实验 | 第79页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期的变化 | 第79页 |
| ·功效成分对细胞平面迁移能力的影响 | 第79页 |
| ·功效成分对细胞粘附能力的影响 | 第79页 |
| ·数据处理 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-88页 |
| ·药物对细胞形态学的改变 | 第79-80页 |
| ·功效成分对细胞生存的影响 | 第80-81页 |
| ·功效成分对细胞相对活力的影响 | 第81页 |
| ·功效成分对细胞总蛋白含量的影响 | 第81-82页 |
| ·功效成分对细胞DNA合成的影响 | 第82-83页 |
| ·药物对细胞生长曲线的影响 | 第83-84页 |
| ·功效成分对细胞周期的影响 | 第84-85页 |
| ·功效成分对细胞迁移的影响 | 第85-86页 |
| ·功效成分对VSMC与细胞外基质粘附的影响 | 第86-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| ·评价血管平滑肌细胞的增殖作用时,需区分抗增殖与细胞毒性的影响 | 第88-89页 |
| ·功效成分有效抑制血清刺激的血管平滑肌细胞增殖 | 第89页 |
| ·功效成分有效抑制血清刺激的血管平滑肌细胞的迁移 | 第89-90页 |
| ·功效成分抑制血管平滑肌细胞与细胞外基质蛋白的粘附 | 第90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 第4章 大豆苷元及其衍生物的吸收代谢及其对VSMC的功能影响 | 第91-114页 |
| 第1节 大豆苷元衍生物在VSMC中的吸收代谢研究 | 第91-103页 |
| ·材料与方法 | 第92-95页 |
| ·材料与仪器 | 第92页 |
| ·大豆苷元及其衍生物的理化性质及配制 | 第92-93页 |
| ·生物样品中药物浓度测定的液相色谱法的建立 | 第93-94页 |
| ·细胞体内代谢研究 | 第94-95页 |
| ·数据处理 | 第95页 |
| ·结果 | 第95-102页 |
| ·HPLC法检测细胞裂解液中的大豆苷元及其衍生物 | 第95页 |
| ·HPLC法检测细胞裂解液中的大豆苷元及其衍生物的标准曲线 | 第95-96页 |
| ·HPLC法检测细胞裂解液中的大豆苷元及其衍生物的精密度及回收率实验 | 第96-97页 |
| ·大豆苷元及化合物DD1,DD2在血管平滑肌细胞中的吸收 | 第97-101页 |
| ·大豆苷元及化合物DD1,DD2在血管平滑肌细胞中的代谢研究 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102页 |
| ·大豆苷元苯磺酸酯化合物更易被血管平滑肌细胞吸收代谢发挥其功效 | 第102页 |
| ·大豆苷元苯磺酸酯化合物在血管平滑肌细胞中代谢为原药,从而发挥其功效 | 第102页 |
| ·小结 | 第102-103页 |
| 第2节 大豆苷元及其衍生物对血管平滑肌细胞的影响作用 | 第103-114页 |
| ·材料与方法 | 第103-105页 |
| ·材料与试剂 | 第103-104页 |
| ·人脐动脉VSMCs的增殖培养与检测 | 第104页 |
| ·细胞形态观察 | 第104页 |
| ·台盼蓝染色检测细胞存活率 | 第104页 |
| ·MTT比色法检测细胞相对活力 | 第104页 |
| ·Bradford法检测细胞总蛋白含量 | 第104页 |
| ·BrdU掺入法测定细胞DNA合成 | 第104页 |
| ·对细胞生长曲线的影响实验 | 第104页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期的变化 | 第104页 |
| ·细胞平面迁移能力的检测 | 第104-105页 |
| ·细胞粘附能力的检测 | 第105页 |
| ·数据处理 | 第105页 |
| ·结果 | 第105-111页 |
| ·对细胞形态学影响 | 第105-106页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对细胞存活率的影响 | 第106页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对细胞相对活力的影响 | 第106-107页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对细胞总蛋白含量的影响 | 第107页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对细胞DNA合成的影响 | 第107-108页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对细胞生长曲线的影响 | 第108-109页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对细胞迁移的影响 | 第109-110页 |
| ·大豆苷元衍生物对细胞与细胞外基质的粘附作用影响 | 第110页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对细胞周期的影响 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-113页 |
| ·大豆苷元及其衍生物有效抑制血清刺激增殖的血管平滑肌细胞生长 | 第111-112页 |
| ·大豆苷元及其衍生物有效抑制血清刺激增殖的血管平滑肌细胞迁移 | 第112页 |
| ·大豆苷元及其衍生物对血管平滑肌细胞与细胞外基质蛋白粘附造成影响 | 第112-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 第5章 天然产物功效成分抗VSMCS增殖的可能机制研究 | 第114-127页 |
| 第1节 功效成分对NOS/NO的影响 | 第114-121页 |
| ·材料与方法 | 第114-117页 |
| ·材料与试剂 | 第114-115页 |
| ·Bradford法检测细胞蛋白含量 | 第115页 |
| ·硝酸还原酶法检测细胞NO的产生 | 第115页 |
| ·催化反应法检测细胞NOS活力 | 第115页 |
| ·对VSMCs中NOS mRNA表达的影响 | 第115-116页 |
| ·数据处理 | 第116-117页 |
| ·结果 | 第117-120页 |
| ·功效成分对细胞NO含量影响 | 第117页 |
| ·药物对细胞NOS活力的影响 | 第117-118页 |
| ·功效成分对VSMCs中eNOS mRNA表达的影响 | 第118-120页 |
| ·讨论 | 第120页 |
| ·小结 | 第120-121页 |
| 第2节 功效成分对VSMC周期相关因子MRNA表达的影响 | 第121-127页 |
| ·材料与方法 | 第121-123页 |
| ·材料与试剂 | 第121-122页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第122页 |
| ·引物设计 | 第122页 |
| ·实时荧光定量聚合酶链式反应 | 第122-123页 |
| ·结果分析 | 第123页 |
| ·结果 | 第123-125页 |
| ·功效成分对细胞中CDK2 mRNA表达水平的影响 | 第123-124页 |
| ·功效成分对细胞中p27~(kip1) mRNA表达水平的影响 | 第124页 |
| ·功效成分对细胞中cycin E mRNA表达水平的影响 | 第124-125页 |
| ·讨论 | 第125-126页 |
| ·功效成分下调CDK2 mRNA的表达 | 第125页 |
| ·功效成分上调细胞中p27~(kip1) mRNA的表达 | 第125-126页 |
| ·功效成分干预组细胞中cycin E的过度表达,可能是代偿性修复所致 | 第126页 |
| ·小结 | 第126-127页 |
| 第6章 结论与展望 | 第127-129页 |
| ·结论 | 第127-128页 |
| ·进一步研究工作的方向 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-141页 |
