| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-24页 |
| ·RNA 依赖的RNA 聚合酶的分类及命名 | 第15页 |
| ·植物 RDRs 的分离鉴定 | 第15-16页 |
| ·植物 RDRs 的结构特点 | 第16-17页 |
| ·植物 RDRs 的基因表达调控 | 第17页 |
| ·植物RDRs 的非生物胁迫诱导因子 | 第17页 |
| ·植物RDRs 的生物胁迫诱导因子 | 第17页 |
| ·植物 RDRs 的生物学功能 | 第17-23页 |
| ·植物RDRs 与RNA 沉默 | 第18-21页 |
| ·RNA 沉默 | 第18页 |
| ·RNA 沉默的途径 | 第18-20页 |
| ·RDRs 在PTGS 和VIGS 中的作用 | 第20-21页 |
| ·RDRs 与植物抗病防御 | 第21-22页 |
| ·RDRs 的其它功能 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-48页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第25页 |
| ·PCR 引物 | 第25-28页 |
| ·实验方法 | 第28-48页 |
| ·RNA 提取 | 第28-29页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第28页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第28-29页 |
| ·甲醛变性凝胶进行RNA 电泳 | 第29页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第29-30页 |
| ·cDNA 回收纯化 | 第30页 |
| ·cDNA 的5′加尾反应 | 第30页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第30-33页 |
| ·兼并引物PCR 获得NgRDR1 中间片段 | 第30-31页 |
| ·5′-RACE 获得5′端序列 | 第31-32页 |
| ·3′-RACE 获得3′端序列 | 第32-33页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第33页 |
| ·NgRDR1 全长基因组序列的获得 | 第33-35页 |
| ·CTAB 法提取心叶烟基因组总DNA | 第33-34页 |
| ·总DNA 提取产物的纯化 | 第34-35页 |
| ·NgRDR1 基因启动子的分离 | 第35-37页 |
| ·DNA 的限制酶酶切反应 | 第35页 |
| ·连接反应 | 第35页 |
| ·PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·NgRDR1 基因启动子的反向PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·上游启动子序列的分析 | 第37页 |
| ·电泳目的片段的回收 | 第37-38页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第39页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第39-42页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第39-40页 |
| ·大量提取质粒DNA | 第40-41页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第41-42页 |
| ·对重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·半定量RT-PCR 分析 | 第42-43页 |
| ·总RNA 的提取 | 第42页 |
| ·琼脂糖甲醛变性胶电泳 | 第42页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第42-43页 |
| ·半定量RT-PCR 检测 | 第43页 |
| ·植物表达载体的构建与转化 | 第43-46页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·植物RNAi 表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第46页 |
| ·NgRDR1 启动子缺失表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-73页 |
| ·心叶烟RNA 依赖的RNA 聚合酶基因的分离 | 第48-51页 |
| ·心叶烟RNA 的提取及反转录 | 第48页 |
| ·NgRDR1 中间片段的分离 | 第48-49页 |
| ·NgRDR1 5′片段的分离 | 第49-50页 |
| ·NgRDR1 3′片段的分离 | 第50页 |
| ·NgRDR1 全长cDNA 的分离 | 第50-51页 |
| ·NgRDR1 的序列分析 | 第51-64页 |
| ·NgRDR1 的全长cDNA 分析 | 第51-56页 |
| ·NgRDR1 编码的蛋白质序列分析 | 第56-58页 |
| ·NgRDR1 基因组序列分析 | 第58页 |
| ·NgRDR1 的分子进化分析 | 第58-60页 |
| ·NgRDR1 启动子序列分析 | 第60-64页 |
| ·NgRDR1 基因的表达特性分析 | 第64-69页 |
| ·非生物胁迫对NgRDR1 mRNA 水平的影响 | 第64-66页 |
| ·生物胁迫对NgRDR1 mRNA 水平的影响 | 第66-69页 |
| ·NgRDR1 基因在转基因烟草中的表达及初步抗病分析 | 第69-73页 |
| ·转基因烟草表达载体的构建 | 第69页 |
| ·转基因再生植株的获得 | 第69-70页 |
| ·T_0 代转基因植株的鉴定 | 第70-71页 |
| ·转基因植株的PCR 鉴定 | 第70页 |
| ·转基因植株的半定量RT-PCR 分析 | 第70-71页 |
| ·T_1 代转基因植株的鉴定及转基因植株的抗性分析 | 第71-73页 |
| ·T_1 代转基因植株的PCR 鉴定 | 第71页 |
| ·病毒抗性分析 | 第71-72页 |
| ·下一步的实验计划 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| ·NgRDR1 的序列结构特征 | 第73页 |
| ·NgRDR1 在外界胁迫条件下的诱导表达分析 | 第73-75页 |
| ·NgRDR1 基因启动子的克隆 | 第75页 |
| ·NgRDR1 在转基因烟草抗病中的作用 | 第75-76页 |
| 小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附：硕士阶段已发表论文 | 第90页 |
