| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-26页 |
| ·乳铁蛋白概述 | 第13-24页 |
| ·乳铁蛋白的发现与分布 | 第13-14页 |
| ·乳铁蛋白的分子结构 | 第14-16页 |
| ·乳铁蛋白的理化性质 | 第16-17页 |
| ·乳铁蛋白的生物学功能 | 第17-22页 |
| ·乳铁蛋白应用及国内外研究现状 | 第22-24页 |
| ·本研究目的及意义 | 第24页 |
| ·本研究立题依据 | 第24-26页 |
| 第二章 牛乳铁蛋白N-叶结构的生物信息学分析 | 第26-36页 |
| ·牛乳铁蛋白N-叶生物信息学分析 | 第26-29页 |
| ·生物信息学软件模拟牛乳铁蛋白N-叶(1-333AA)空间三维结构 | 第26页 |
| ·预测牛乳铁蛋白N-叶表面电荷分布 | 第26-27页 |
| ·牛乳铁蛋白N-叶二级结构预测 | 第27-28页 |
| ·牛乳铁蛋白N-叶跨膜区预测 | 第28页 |
| ·牛乳铁蛋白N-叶糖基化位点预测 | 第28-29页 |
| ·密码子优化牛乳铁蛋白N-叶基因 | 第29-34页 |
| ·牛乳铁蛋白N-叶基因密码子优化分析 | 第29页 |
| ·根据密码子优化原则对N-叶基因进行优化改造 | 第29-32页 |
| ·对牛乳铁蛋白N-叶基因编码氨基酸序列进行分析 | 第32-34页 |
| ·牛乳铁蛋白N-叶起始密码子AUG 附近二级结构自由能分析 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·牛乳铁蛋白N-叶结构分析 | 第34-35页 |
| ·密码子优化改造牛乳铁蛋白N-叶基因 | 第35-36页 |
| 第三章 牛乳铁蛋白 N-叶基因在 P.pastoris GS115 中表达 | 第36-66页 |
| ·实验材料 | 第36-39页 |
| ·质粒与菌株 | 第36页 |
| ·工具酶及其它试剂 | 第36-37页 |
| ·培养基及缓冲液的配制 | 第37-38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-39页 |
| ·合成引物及DNA 测序 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-50页 |
| ·PCR 引物合成 | 第39页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第39-40页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒转化Escherichia coli DH5α | 第41页 |
| ·菌落PCR 筛选E.coli DH5α重组转化子 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒电转化酵母与酵母重组子筛选 | 第42-43页 |
| ·重组酵母摇瓶水平发酵 | 第43-44页 |
| ·重组酵母摇瓶水平上培养基pH 条件的优化 | 第44页 |
| ·共表达透明颤菌血红蛋白基因vgb 优化溶氧条件 | 第44-47页 |
| ·重组酵母5 L 发酵罐水平高密度发酵 | 第47-48页 |
| ·rBLfN 去糖基化分析及Western Blot 检测 | 第48-49页 |
| ·His-bind 镍柱纯化rBLfN | 第49页 |
| ·rBLfN 铁结合活性分析 | 第49-50页 |
| ·rBLfN 抑菌活性检测 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-60页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌菌落PCR 筛选阳性转化子 | 第51-52页 |
| ·酵母重组子的构建及菌落PCR 筛选阳性重组子 | 第52页 |
| ·酵母重组子摇瓶水平表达 | 第52-53页 |
| ·重组酵母摇瓶水平pH 条件优化 | 第53-54页 |
| ·共表达透明颤菌血红蛋白基因vgb 优化溶氧条件 | 第54-56页 |
| ·酵母重组子5 L 发酵罐水平高密度发酵 | 第56-58页 |
| ·去糖基化及Western Blot 检测rBLfN | 第58页 |
| ·His-bind 镍柱纯化rBLfN | 第58-59页 |
| ·rBLfN 铁结合活性分析 | 第59-60页 |
| ·rBLfN 抑菌活性检测 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-66页 |
| ·表达系统的选择 | 第60-61页 |
| ·基因密码子优化改造及其表达 | 第61-62页 |
| ·高密度发酵的优势 | 第62-63页 |
| ·乳铁蛋白N-叶功能 | 第63页 |
| ·基因高效表达策略研究 | 第63-66页 |
| 第四章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
