| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| ·生物柴油概述 | 第12-14页 |
| ·生物柴油主要理化性质 | 第12-13页 |
| ·生物柴油主要生产方法概述 | 第13-14页 |
| ·生物柴油目前研究状况 | 第14页 |
| ·微生物油脂概述 | 第14-19页 |
| ·微生物油脂常规优化方法 | 第15-16页 |
| ·微生物油脂代谢调控机理分析 | 第16-19页 |
| ·脂肪酶概述 | 第19-24页 |
| ·脂肪酶的理化性质 | 第20页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第20-21页 |
| ·脂肪酶在真菌中表达研究 | 第21-22页 |
| ·影响微生物脂肪酶基因表达的因素 | 第22-24页 |
| ·酿酒酵母表达系统的研究 | 第24-25页 |
| ·酵母表达系统的特点 | 第24页 |
| ·酿酒酵母表达系统的特点 | 第24-25页 |
| ·酿酒酵母油脂的研究 | 第25页 |
| ·本课题的研究目的及思路 | 第25-28页 |
| 第二章 酿酒酵母启动子基因PGK1的克隆 | 第28-38页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·实验试剂及仪器设备 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第29页 |
| ·PCR扩增启动子PGK1基因 | 第29-30页 |
| ·从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第30页 |
| ·目的基因与T载体的连接 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的电转化 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的克隆和序列分析 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 假丝酵母(Candida sp.99-125)脂肪酶基因Lip2的克隆 | 第38-46页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·实验试剂及仪器设备 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·假丝酵母基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·PCR扩增脂肪酶Lip2基因 | 第39-40页 |
| ·从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第40页 |
| ·目的基因与T载体的连接 | 第40页 |
| ·重组质粒的电转化 | 第40-41页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第41页 |
| ·PCR产物的克隆和序列分析 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-44页 |
| ·脂肪酶基因Lip2的PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·重组子的鉴定 | 第42页 |
| ·测序结果分析 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 第四章 生物柴油基因工程菌的构建及表达 | 第46-62页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌株与质粒 | 第46页 |
| ·实验试剂及仪器设备 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-55页 |
| ·PCR扩增终止子基因CYC1 | 第47-48页 |
| ·从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第48页 |
| ·目的基因与T载体的连接 | 第48页 |
| ·重组质粒的电转化 | 第48页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第48页 |
| ·PCR产物的克隆和序列分析 | 第48页 |
| ·重叠PCR | 第48-50页 |
| ·YEp352-PLC重组表达质粒的构建 | 第50页 |
| ·pYES2-Lip2重组表达质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·重组子的鉴定 | 第51-52页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·酿酒酵母的电转化 | 第52-53页 |
| ·重组酿酒酵母的筛选 | 第53页 |
| ·重组酵母的菌落PCR鉴定 | 第53页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的SDS—PAGE分析 | 第54页 |
| ·脂肪酶酶活测定 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-61页 |
| ·终止子基因CYC1的PCR扩增 | 第55页 |
| ·测序结果分析 | 第55-56页 |
| ·pYES2-Lip2重组子的鉴定 | 第56-58页 |
| ·重叠PCR结果 | 第58页 |
| ·YEp352-PLC重组子的鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第59页 |
| ·重组酵母的菌落PCR鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白(YEp352-PLC)的SDS—PAGE分析结果 | 第60-61页 |
| ·脂肪酶酶活的测定 | 第61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第五章 响应面法优化酿酒酵母产油脂条件研究 | 第62-70页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·菌种 | 第62页 |
| ·培养基及培养条件 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-68页 |
| ·Plackett-Burman设计筛选影响产油因子 | 第63-64页 |
| ·最陡爬坡实验设计及其结果 | 第64-65页 |
| ·响应面设计确定显著影响因子的最佳值 | 第65-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第六章 结论 | 第70-72页 |
| 第七章 问题与建议 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录一 试剂 | 第80-81页 |
| 附录二 仪器设备 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第86-88页 |
| 作者和导师简介 | 第88-89页 |
| 北京化工大学 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第89-90页 |
