| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-18页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) | 第11-14页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征及其病原特征 | 第11页 |
| ·PRRSV的基因组结构与蛋白质 | 第11-13页 |
| ·PRRS的流行病学特点 | 第13页 |
| ·PRRSV的免疫学反应 | 第13页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第13-14页 |
| ·甲病毒复制子 | 第14-15页 |
| ·甲病毒的基因组结构 | 第14页 |
| ·"自主复制型"RNA疫苗 | 第14-15页 |
| ·"自杀性"DNA疫苗 | 第15页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第15-18页 |
| ·杆状病毒的生物学特点 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体在疫苗研究中的应用 | 第17-18页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-30页 |
| ·试验材料 | 第19-21页 |
| ·毒株、细胞与菌株 | 第19页 |
| ·载体与质粒 | 第19页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第19-20页 |
| ·培养基、抗生素的配制 | 第20页 |
| ·免疫反应试验所用抗原及血清 | 第20页 |
| ·主要缓冲液及相关试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·试验动物 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-30页 |
| ·限制性酶切反应 | 第21页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第21页 |
| ·线性质粒DNA末端去磷酸化 | 第21-22页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第22页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第22-23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组杆状病毒构建的操作流程及示意图 | 第24页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第24-25页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第25页 |
| ·重组Bacmid转染Sf9细胞(脂质体介导的转染法) | 第25页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第25-26页 |
| ·重组杆状病毒转导BHK细胞 | 第26页 |
| ·Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第26-27页 |
| ·GP5-ELISA试验及PRRSV全病毒ELISA试验 | 第27页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第27-28页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第28-29页 |
| ·动物试验 | 第29页 |
| ·统计学方法 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-42页 |
| ·穿梭质粒的构建 | 第30-33页 |
| ·中间质粒pSCA1-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建 | 第30-32页 |
| ·穿梭质粒pFastBac-VSV/G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建 | 第32-33页 |
| ·重组Bacmid-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建 | 第33-34页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第34-35页 |
| ·重组杆状病毒毒价的测定 | 第35页 |
| ·Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第35-36页 |
| ·重组杆状病毒在小鼠体内的免疫效率检测 | 第36-42页 |
| ·免疫小鼠的ELISA抗体水平 | 第37-38页 |
| ·特异性抗猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体检测 | 第38-40页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ水平检测 | 第40页 |
| ·荧光定量PCR方法分析免疫小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的mRNA水平 | 第40-42页 |
| 5 讨论与结论 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·PRRS的保护性抗原基因 | 第42页 |
| ·杆状病毒载体及甲病毒复制子 | 第42-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
