| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-48页 |
| 第一节 胚胎干细胞的增殖与分化研究 | 第18-25页 |
| ·干细胞的概述 | 第18-20页 |
| ·维持ES细胞增殖和不分化的因素及其信号转导 | 第20-23页 |
| ·内源性调控因子 | 第21-22页 |
| ·胞外因子介导的信号途径 | 第22-23页 |
| ·ES细胞的体外诱导分化 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24-25页 |
| 第二节 禽类原始生殖细胞的发生和迁移 | 第25-29页 |
| ·禽类PGC概况 | 第25-26页 |
| ·禽类PGC的起源 | 第26-27页 |
| ·禽类PGC的迁移 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三节 禽类PGC的增殖调控 | 第29-39页 |
| ·PGC的增殖特征 | 第29-30页 |
| ·生长因子调控PGC增殖 | 第30-33页 |
| ·白血病抑制因子(LIF) | 第30-31页 |
| ·干细胞生长因子(SCF) | 第31页 |
| ·碱性成纤维生长因子(bFGF) | 第31-32页 |
| ·骨形成蛋白-4(BMP-4) | 第32页 |
| ·维甲酸(RA) | 第32页 |
| ·其他生长因子 | 第32-33页 |
| ·细胞信号通路调控PGC增殖 | 第33-37页 |
| ·G-蛋白偶联受体途径 | 第33-34页 |
| ·酪氨酸激酶受体途径 | 第34-36页 |
| ·丝氨酸/苏氨酸激酶受体途径 | 第36-37页 |
| ·细胞周期相关基因调控PGC增殖 | 第37-39页 |
| 第四节 禽类PGC的分化调控 | 第39-43页 |
| ·禽类性腺发育和性别调控的分子机理 | 第39-40页 |
| ·胚胎性腺的发育 | 第39页 |
| ·性腺发育的基因调控 | 第39-40页 |
| ·性腺发育的类固醇激素调控 | 第40页 |
| ·PGC的分化 | 第40-43页 |
| ·RA在PGC分化中的调控 | 第41-42页 |
| ·Nanos2和PGC分化 | 第42-43页 |
| 第五节 禽类PGC在制作转基因鸡中的应用 | 第43-46页 |
| 第六节 本研究的目的和内容 | 第46-48页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第46页 |
| ·研究目标及内容 | 第46-48页 |
| 第二章 表皮生长因子对鸡胚原始生殖细胞增殖调控机理的研究 | 第48-86页 |
| 第一节 鸡胚原始生殖细胞的分离、培养及鉴定 | 第48-68页 |
| 摘要 | 第48页 |
| ·引言 | 第48-49页 |
| ·材料与方法 | 第49-59页 |
| ·实验动物 | 第49-50页 |
| ·主要器材 | 第50页 |
| ·主要试剂及配制 | 第50-52页 |
| ·饲养层的制备 | 第52页 |
| ·血液中PGC的分离、纯化和培养 | 第52-53页 |
| ·生殖嵴和性腺PGC的分离、纯化和培养 | 第53-54页 |
| ·鸡胚PGC的染色鉴定 | 第54-56页 |
| ·RT-PCR检测PGC特异基因的表达 | 第56-59页 |
| ··性腺切片免疫组织化学染色 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-65页 |
| ·血液PGC体外分离培养及鉴定 | 第59-61页 |
| ·生殖嵴、性腺PGC体外分离培养及鉴定 | 第61-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| ·PGC的分离及培养 | 第65-66页 |
| ·鸡胚PGC的培养条件 | 第66-67页 |
| ·鸡胚PGC的鉴定 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68页 |
| 第二节 表皮生长因子对鸡胚原始生殖细胞增殖的影响及其机理的研究 | 第68-86页 |
| 摘要 | 第68-69页 |
| ·引言 | 第69-70页 |
| ·材料与方法 | 第70-76页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·主要器材 | 第70页 |
| ·主要试剂及配制 | 第70-71页 |
| ·PGC培养及药物处理 | 第71-72页 |
| ·BrdU免疫组化 | 第72页 |
| ·SSEA-1,NF-κB免疫组化 | 第72-73页 |
| ·RNA提取和常规RT-PCR | 第73页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第73-74页 |
| ·PGC蛋白质的提取和Western Blot分析 | 第74-76页 |
| ·数据分析 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-83页 |
| ·EGF对PGC增殖的影响 | 第76-78页 |
| ·EGFR在EGF对PGC促增殖中的作用 | 第78-80页 |
| ·PKC在EGF对PGC促增殖中的介导作用 | 第80-81页 |
| ·NF-kB在EGF对PGC促增殖中的介导作用 | 第81-82页 |
| ·EGF对细胞周期蛋白mRNA表达水平的影响 | 第82页 |
| ·EGF对细胞凋亡相关蛋白表达的影响 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第三章 雌激素对鸡胚原始生殖细胞增殖调控机理的研究 | 第86-110页 |
| 摘要 | 第86页 |
| ·引言 | 第86-88页 |
| ·材料与方法 | 第88-93页 |
| ·实验动物 | 第88页 |
| ·主要器材 | 第88页 |
| ·主要试剂及配制 | 第88-89页 |
| ·PGC的培养和处理 | 第89页 |
| ·E2注射 | 第89页 |
| ·鸡胚性别鉴定 | 第89-90页 |
| ·吉姆萨染色 | 第90-91页 |
| ·细胞周期流式分析 | 第91页 |
| ·Brdu&SSEA-1双标染色 | 第91页 |
| ·GPR30和β-catenin的免疫荧光染色 | 第91页 |
| ·GPR30 SiRNA转染 | 第91-92页 |
| ·RNA提取和常规RT-PCR | 第92页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第92-93页 |
| ·PGC蛋白质的提取和Western Blot分析 | 第93页 |
| ·数据分析 | 第93页 |
| ·结果 | 第93-106页 |
| ·ERα,ERβ和GPR30在PGC中表达情况 | 第93-95页 |
| ·GPR30在不同时期鸡胚性腺中的表达情况 | 第95-96页 |
| ·E_2在体外对PGC增殖的影响 | 第96-98页 |
| ·E_2在体内对PGC增殖的影响 | 第98-100页 |
| ·EGFR在E_2对PGC促增殖中的作用 | 第100-101页 |
| ·Akt在E_2对PGC促增殖中的作用 | 第101-102页 |
| ·GSK3β/β-catenin在E_2对PGC促增殖中的作用 | 第102-104页 |
| ·E_2对细胞周期蛋白表达水平的影响 | 第104页 |
| ·E_2对细胞凋亡相关蛋白表达的影响 | 第104-106页 |
| ·讨论 | 第106-108页 |
| ·小结 | 第108-110页 |
| 第四章 人参皂甙(GS)对鸡胚原始生殖细胞增殖的影响 | 第110-118页 |
| 摘要 | 第110页 |
| ·引言 | 第110-111页 |
| ·材料与方法 | 第111-112页 |
| ·实验动物 | 第111页 |
| ·主要器材 | 第111页 |
| ·主要试剂及配制 | 第111-112页 |
| ·PGC培养及药物处理 | 第112页 |
| ·PKC染色 | 第112页 |
| ·PGC蛋白质的提取和Western Blot分析 | 第112页 |
| ·数据分析 | 第112页 |
| ·结果 | 第112-115页 |
| ·人参皂甙(GS)对PGC增殖的影响 | 第112页 |
| ·PKC在GS对PGC促增殖中的介导作用 | 第112-114页 |
| ·NF-KB在GS对PGC促增殖中的介导作用 | 第114-115页 |
| ·讨论 | 第115-117页 |
| ·小结 | 第117-118页 |
| 第五章 维甲酸(RA)对鸡原始生殖细胞减数分裂的影响 | 第118-130页 |
| 摘要 | 第118页 |
| ·引言 | 第118-119页 |
| ·材料与方法 | 第119-121页 |
| ·实验动物 | 第119页 |
| ·主要器材 | 第119页 |
| ·主要试剂及配制 | 第119-120页 |
| ·血液PGC的培养和处理 | 第120页 |
| ·鸡胚性腺组织培养和处理 | 第120页 |
| ·RNA提取和Real-Time RT-PCR | 第120-121页 |
| ·吉姆萨染色 | 第121页 |
| ·流式分析 | 第121页 |
| ·数据分析 | 第121页 |
| ·结果 | 第121-126页 |
| ·RA在体外诱导27期性腺进入减数分裂 | 第121-122页 |
| ·体外培养的雌雄PGC分化程度的差异 | 第122-123页 |
| ·RA促进雄性PGC进入减数分裂 | 第123-124页 |
| ·RA促进雌性PGC进入减数分裂 | 第124-126页 |
| ·讨论 | 第126-128页 |
| ·小结 | 第128-130页 |
| 第六章 结论和创新点 | 第130-132页 |
| ·结论 | 第130-131页 |
| ·创新点 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
