| 中文摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-25页 |
| 1.1 生物催化与酶 | 第17页 |
| 1.2 α-L-鼠李糖苷酶 | 第17-22页 |
| 1.2.1 α-L-鼠李糖苷酶简介 | 第17-19页 |
| 1.2.2 α-L-鼠李糖苷酶结构特征 | 第19-21页 |
| 1.2.3 α-L-鼠李糖苷酶生物催化应用 | 第21-22页 |
| 1.3 多形拟杆菌 | 第22-24页 |
| 1.3.1 人体肠道细菌 | 第22-23页 |
| 1.3.2 多形拟杆菌 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶基因克隆与异源表达 | 第25-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 序列分析 | 第26-27页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.3 异源表达与亲和纯化 | 第30-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-42页 |
| 2.3.1 序列分析 | 第32-37页 |
| 2.3.2 基因克隆 | 第37-39页 |
| 2.3.3 异源表达与亲和纯化 | 第39-42页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶酶学性质表征 | 第43-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 3.2.1 酶活测定方法 | 第43-44页 |
| 3.2.2 最适pH测定 | 第44页 |
| 3.2.3 最适温度测定 | 第44页 |
| 3.2.4 酶反应动力学常数测定 | 第44-45页 |
| 3.2.5 有机溶剂对酶活影响 | 第45页 |
| 3.2.6 pH稳定性测定 | 第45页 |
| 3.2.7 热稳定性测定 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-54页 |
| 3.3.1 pH对酶活影响 | 第46页 |
| 3.3.2 温度对酶活影响 | 第46-49页 |
| 3.3.3 酶反应动力学常数 | 第49-51页 |
| 3.3.4 有机溶剂对酶活的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.5 pH稳定性 | 第52-53页 |
| 3.3.6 热稳定性 | 第53-54页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 BtRha78A功能残基确定 | 第56-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 丙氨酸扫描突变技术 | 第56页 |
| 4.2.2 全质粒PCR构建BtRha78A关键残基的突变体 | 第56-59页 |
| 4.2.3 BtRha78A关键残基突变体酶的异源表达与亲和纯化 | 第59页 |
| 4.2.4 BtRha78A关键残基突变体的酶活力测定 | 第59页 |
| 4.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 4.3.1 BtRha78A结构域组成分析 | 第59-61页 |
| 4.3.2 BtRha78A催化广义酸碱对 | 第61页 |
| 4.3.3 BtRha78A与产物类似物Tris的相互作用 | 第61-64页 |
| 4.3.4 BtRha78A功能残基确定 | 第64-67页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第67-68页 |
| 第五章 BtRha78A广义酸基序功能解析 | 第68-79页 |
| 5.1 实验材料 | 第68页 |
| 5.2 实验方法 | 第68-73页 |
| 5.2.1 全质粒PCR构建定点突变体 | 第68-69页 |
| 5.2.2 交错延伸PCR构建定点突变体 | 第69-72页 |
| 5.2.3 BtRha78A广义酸基序突变体异源表达与亲和纯化 | 第72页 |
| 5.2.4 BtRha78A广义酸基序突变体酶活测定 | 第72-73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-78页 |
| 5.3.1 BtRha78A广义酸基序 | 第73-74页 |
| 5.3.2 BtRha78A广义酸基序突变体构建 | 第74-76页 |
| 5.3.3 广义酸基序突变体的异源表达与亲和纯化 | 第76-77页 |
| 5.3.4 广义酸基序突变体酶活力 | 第77-78页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 个人简况及联系方式 | 第88-89页 |
