精氨酸脱亚胺酶在红曲中的表达
| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词简表 (Abbreviations) | 第10-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-23页 |
| 1.1 红曲霉概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 红曲霉 | 第14页 |
| 1.1.2 红曲霉的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.3 红曲霉的活性物质 | 第15-17页 |
| 1.1.4 红曲霉国内外研究进展 | 第17页 |
| 1.2 精氨酸脱亚胺酶研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 L-瓜氨酸研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 丝状真菌转化方法研究进展 | 第19-21页 |
| 1.5 课题内容及研究意义 | 第21-22页 |
| 1.5.1 本课题的主要研究内容 | 第21页 |
| 1.5.2 本课题的研究意义 | 第21-22页 |
| 本章小结 | 第22-23页 |
| 第二章 微型Ti质粒的构建 | 第23-44页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验设计 | 第23-24页 |
| 2.3 实验准备 | 第24-28页 |
| 2.3.1 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.3.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.3.3 相关溶液配方 | 第26-27页 |
| 2.3.4 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.3.5 试剂盒 | 第27页 |
| 2.3.6 引物合成和测序 | 第27-28页 |
| 2.4 实验方法 | 第28-37页 |
| 2.4.1 引物的设计与合成 | 第28-33页 |
| 2.4.2 微型Ti质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.2.1 线性载体的获得 | 第33-34页 |
| 2.4.2.2 ADI基因扩增 | 第34页 |
| 2.4.2.3 无缝克隆构建微型Ti质粒 | 第34页 |
| 2.4.3 DH5α感受态细胞的制备方法 | 第34-35页 |
| 2.4.4 重组质粒的转化 | 第35页 |
| 2.4.5 转化子的菌落PCR鉴定 | 第35页 |
| 2.4.6 重组质粒测序鉴定 | 第35页 |
| 2.4.7 质粒的抽提 | 第35-36页 |
| 2.4.8 DNA胶回收 | 第36-37页 |
| 2.5 实验结果与讨论 | 第37-43页 |
| 2.5.1 线性载体的PCR扩增结果 | 第37页 |
| 2.5.2 ADI基因的扩增结果 | 第37-38页 |
| 2.5.3 转化子菌落PCR鉴定结果 | 第38-39页 |
| 2.5.4 转化子测序结果 | 第39-42页 |
| 2.5.5 讨论 | 第42-43页 |
| 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 根瘤农杆菌的转化 | 第44-51页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验设计 | 第44页 |
| 3.3 实验准备 | 第44-47页 |
| 3.3.1 实验仪器 | 第44-45页 |
| 3.3.2 实验试剂 | 第45-46页 |
| 3.3.3 相关溶液配方 | 第46-47页 |
| 3.3.4 菌株和质粒 | 第47页 |
| 3.3.5 试剂盒 | 第47页 |
| 3.4 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.4.1 根瘤农杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| 3.4.2 根瘤农杆菌转化 | 第47页 |
| 3.4.3 重组子的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第48-50页 |
| 3.5.1 根瘤农杆菌感受态细胞的转化效率 | 第48-49页 |
| 3.5.2 转化子的鉴定 | 第49页 |
| 3.5.3 讨论 | 第49-50页 |
| 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 根瘤农杆菌介导转化红曲霉 | 第51-65页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验设计 | 第51页 |
| 4.3 实验准备 | 第51-55页 |
| 4.3.1 实验仪器 | 第51-52页 |
| 4.3.2 实验试剂 | 第52-54页 |
| 4.3.3 相关溶液配方 | 第54-55页 |
| 4.3.4 菌株和质粒 | 第55页 |
| 4.3.5 试剂盒 | 第55页 |
| 4.4 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.4.1 潮霉素B浓度的确定 | 第55-56页 |
| 4.4.2 红曲霉孢子悬浮液的制备 | 第56页 |
| 4.4.3 根瘤农杆菌的活化和诱导培养 | 第56页 |
| 4.4.4 红曲霉与根瘤农杆菌的共培养 | 第56页 |
| 4.4.5 转化子的筛选 | 第56页 |
| 4.4.6 薄层色谱法定性检测L-瓜氨酸 | 第56页 |
| 4.4.7 红曲霉基因组的抽提 | 第56-57页 |
| 4.4.8 转化子的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.4.9 遗传稳定性研究 | 第58页 |
| 4.4.10 二乙酰一肟法检测瓜氨酸含量 | 第58页 |
| 4.5 实验结果与讨论 | 第58-64页 |
| 4.5.1 潮霉素浓度的确定 | 第58-59页 |
| 4.5.2 薄层色谱定性检测瓜氨酸 | 第59-60页 |
| 4.5.3 转化子鉴定 | 第60-61页 |
| 4.5.4 遗传稳定性研究 | 第61-62页 |
| 4.5.5 二乙酰一肟法检测瓜氨酸含量 | 第62-63页 |
| 4.5.6 讨论 | 第63-64页 |
| 本章小结 | 第64-65页 |
| 第五章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 总结 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 硕士期间发表的论文和专利 | 第74页 |
