| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 1.前言 | 第11-20页 |
| 1.1 问题的由来 | 第11页 |
| 1.2 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.2.1 斑马鱼及其肾脏发育概述 | 第11-14页 |
| 1.2.2 WT1在哺乳动物中的功能简介 | 第14-15页 |
| 1.2.3 wt1a和wt1b在鱼类中的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.4 细胞自噬及其对肾脏的影响 | 第17-20页 |
| 1.3 研究的目的与意义 | 第20页 |
| 2.材料和方法 | 第20-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第20-21页 |
| 2.1.2 所用载体 | 第21页 |
| 2.1.3 主要的仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验所需的主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-39页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 RNA反转录 | 第24页 |
| 2.2.3 组织蛋白的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 WesternBlot | 第25-26页 |
| 2.2.5 DNA纯化回收 | 第26-27页 |
| 2.2.6 斑马鱼wt1a和wt1b基因CRISPR/Cas9敲除系统构建 | 第27-30页 |
| 2.2.7 斑马鱼显微注射 | 第30-31页 |
| 2.2.8 斑马鱼基因敲除靶位点有效性验证 | 第31-34页 |
| 2.2.9 斑马鱼基因敲除后代突变体筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.10 斑马鱼胚胎整体原位杂交(WISH) | 第35-39页 |
| 2.2.11 Rapamycin处理斑马鱼胚胎 | 第39页 |
| 3.结果 | 第39-50页 |
| 3.1 各组织RNA质量检测 | 第39-40页 |
| 3.2 WesternBlot检测wt1a和wt1b在各组织中的表达情况 | 第40页 |
| 3.3 斑马鱼wt1a和wt1bCRISPR/Cas9系统构建 | 第40-43页 |
| 3.3.1 斑马鱼wt1a和wt1bCRISPR/Cas9敲除靶位点的设计 | 第40-41页 |
| 3.3.2 Cas9mRNA的合成 | 第41-42页 |
| 3.3.3 斑马鱼wt1a和wt1b基因gRNA的合成 | 第42-43页 |
| 3.4 斑马鱼wt1a和wt1b基因敲除靶位点有效性验证 | 第43-45页 |
| 3.5 斑马鱼wt1a和wt1b基因敲除纯合突变体的构建 | 第45-46页 |
| 3.6 基因敲除wt1a和wt1b对斑马鱼幼鱼发育的影响 | 第46-47页 |
| 3.7 斑马鱼中wt1a基因缺失会引起足细胞发育缺陷 | 第47-48页 |
| 3.8 wt1a-/-纯合突变体中细胞自噬被抑制 | 第48-49页 |
| 3.9 wt1a-/-纯合突变体中足细胞损伤可通过rapamycin部分挽救 | 第49-50页 |
| 4.讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 wt1a对斑马鱼肾脏发育的影响 | 第50-51页 |
| 4.2 影响肾脏发育的多种调控因子 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 附录一：文中所使用的部分试剂配制方法 | 第66-68页 |
| 附录二：发表论文情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
