| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩写词表 | 第10-14页 |
| 1 前言 | 第14-20页 |
| 2 材料、仪器及试剂 | 第20-26页 |
| 2.1 细胞株、质粒与实验动物 | 第20页 |
| 2.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.4 主要试剂配制方法 | 第22-26页 |
| 3 实验方法 | 第26-38页 |
| 3.1 构建PJKS-VEGFR2重组质粒 | 第26-28页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第26页 |
| 3.1.2 PCR扩增目的片段 | 第26-27页 |
| 3.1.3 酶切目的片段和质粒 | 第27页 |
| 3.1.4 连接目的片段和质粒片段 | 第27页 |
| 3.1.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| 3.1.6 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第28页 |
| 3.1.7 酶切鉴定 | 第28页 |
| 3.2 构建T4-VEGFR2重组噬菌体 | 第28-29页 |
| 3.2.1 重组质粒转化大肠杆菌BL21 | 第28页 |
| 3.2.2 同源重组 | 第28-29页 |
| 3.2.3 噬菌体培养 | 第29页 |
| 3.3 T4-VEGFR2重组噬菌体的鉴定 | 第29页 |
| 3.3.1 噬菌斑PCR鉴定VEGFR2基因与噬菌体发生重组 | 第29页 |
| 3.3.2 流式细胞术鉴定VEGFR2蛋白展示 | 第29页 |
| 3.4 T4-VEGFR2重组噬菌体与VEGF的结合能力 | 第29-31页 |
| 3.4.1 酶联免疫吸附-噬菌体滴定(ELISA-titer)试验 | 第29-30页 |
| 3.4.2 噬菌体-酶联免疫吸附(phage-ELISA)试验 | 第30-31页 |
| 3.5 重组T4噬菌体对VEGF诱导血管内皮细胞增殖的抑制作用 | 第31-33页 |
| 3.5.1 细胞培养 | 第31-32页 |
| 3.5.2 细胞增殖测定(MTT试验) | 第32-33页 |
| 3.6 利用TRANS-WELL试验研究重组T4噬菌体对血管内皮细胞迁移的抑制作用 | 第33-34页 |
| 3.7 磷酸化-流式细胞术 | 第34页 |
| 3.8 重组T4噬菌体体内抗肿瘤活性 | 第34-35页 |
| 3.9 免疫组织化学(IHC) | 第35-36页 |
| 3.9.1 石蜡切片的制备 | 第35-36页 |
| 3.9.2 免疫组化操作步骤 | 第36页 |
| 3.10 统计学分析 | 第36-38页 |
| 4 实验结果 | 第38-52页 |
| 4.1 VEGFR2胞外结构域在T4噬菌体表面的展示 | 第38-40页 |
| 4.2 T4-VEGFR2重组噬菌体能够特异性结合VEGF | 第40-42页 |
| 4.3 T4-VEGFR2重组噬菌体抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖和迁移 | 第42-45页 |
| 4.4 T4-VEGFR2重组噬菌体抑制VEGF诱导的VEGFR2及其下游信号的磷酸化 | 第45-47页 |
| 4.5 T4-VEGFR2重组噬菌体可以抑制肿瘤生长并延长荷瘤小鼠的存活时间 | 第47-49页 |
| 4.6 T4-VEGFR2重组噬菌体可以降低肿瘤微血管密度(MVD) | 第49-52页 |
| 5 讨论 | 第52-56页 |
| 6 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 综述 | 第62-72页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第74-75页 |
