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通过提高苏氨酸脱氨酶热稳定性提高L-2-氨基丁酸的产量及辅酶利用率

致谢第5-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-9页
主要缩略符号说明第14-15页
第一章 绪论第15-33页
    1.1 引言第15-16页
    1.2 L-2-氨基丁酸生产概况第16-19页
        1.2.1 化学合成法第16页
        1.2.2 酶拆分法第16-17页
        1.2.3 生物合成法第17-19页
    1.3 NAD~+/NADH再生体系研究概况第19-22页
        1.3.1 NAD~+/NADH再生体系的应用第19页
        1.3.2 烟酰胺辅酶的稳定性第19-20页
        1.3.3 NAD~+/NADH再生途径第20-22页
    1.4 蛋白质的热稳定性改造第22-25页
        1.4.1 定向进化第22-24页
        1.4.2 理性设计第24-25页
    1.5 L-ABA合成途径关键酶简介第25-30页
        1.5.1 苏氨酸脱氨酶的研究概况第26-27页
        1.5.2 亮氨酸脱氢酶的研究概况第27-29页
        1.5.3 甲酸脱氢酶的研究概况第29-30页
    1.6 课题研究目标与内容第30-33页
        1.6.1 研究目标第30页
        1.6.2 研究内容第30-33页
第二章 基因克隆与菌株构建第33-49页
    2.1 引言第33页
    2.2 实验材料第33-35页
        2.2.1 主要试剂第33页
        2.2.2 菌株与质粒第33-35页
        2.2.3 培养基与培养条件第35页
        2.2.4 主要仪器与设备第35页
    2.3 实验方法第35-45页
        2.3.1 基因组的提取第36页
        2.3.2 琼脂糖凝胶电泳第36-37页
        2.3.3 质粒提取第37页
        2.3.4 PCR产物纯化第37-38页
        2.3.5 DNA胶回收第38页
        2.3.6 DNA浓度的测定第38-39页
        2.3.7 重组菌的构建第39-42页
        2.3.8 重组菌的诱导表达第42页
        2.3.9 大肠杆菌超声破碎方法第42页
        2.3.10 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳第42-44页
        2.3.11 酶活测定第44-45页
    2.4 结果与讨论第45-47页
        2.4.1 重组菌的表达第45-47页
        2.4.2 重组菌酶活第47页
    2.5 小结第47-49页
第三章 苏氨酸脱氨酶结构改造第49-73页
    3.1 引言第49页
    3.2 实验材料第49-51页
        3.2.1 主要试剂第49-50页
        3.2.2 菌株和质粒第50页
        3.2.3 主要仪器与设备第50-51页
    3.3 实验方法第51-58页
        3.3.1 感受态细胞的制备第51页
        3.3.2 质粒转化第51-52页
        3.3.3 菌落PCR第52页
        3.3.4 定点突变第52页
        3.3.5 定点饱和突变第52-53页
        3.3.6 蛋白质纯化第53-55页
        3.3.7 蛋白质浓度的测定第55页
        3.3.8 酶学性质测定第55-56页
        3.3.9 高通量筛选方法构建第56-57页
        3.3.10 易错PCR第57-58页
        3.3.11 理性设计第58页
    3.4 结果与讨论第58-70页
        3.4.1 苏氨酸脱氨酶的纯化第58-59页
        3.4.2 高通量筛选方法的建立第59-60页
        3.4.3 易错PCR第60-63页
        3.4.4 理性设计第63-65页
        3.4.5 突变体热稳定提高机制解析第65-67页
        3.4.6 组合突变第67-68页
        3.4.7 突变株G323D/F510L/T344A与野生型L-TD性质比较第68-70页
    3.5 小结第70-73页
第四章 多酶催化反应制备L-2-氨基丁酸第73-87页
    4.1 引言第73-74页
    4.2 实验材料第74页
        4.2.1 主要试剂第74页
        4.2.2 菌株第74页
        4.2.3 主要仪器与设备第74页
    4.3 实验方法第74-77页
        4.3.1 HPLC检测方法第75页
        4.3.2 NADH浓度测定第75-76页
        4.3.3 NADH的影响因素第76-77页
        4.3.4 L-ABA合成体系的优化第77页
    4.4 结果与讨论第77-85页
        4.4.1 NADH的影响因素第77-80页
        4.4.2 L-ABA合成体系的优化第80-83页
        4.4.3 改造后体系合成L-ABA第83-85页
    4.5 小结第85-87页
第五章 总结与展望第87-89页
    5.1 总结第87-88页
    5.2 展望第88-89页
参考文献第89-100页
作者简历第100页

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