| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 主要缩略符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-33页 |
| 1.1 引言 | 第15-16页 |
| 1.2 L-2-氨基丁酸生产概况 | 第16-19页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第16页 |
| 1.2.2 酶拆分法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 生物合成法 | 第17-19页 |
| 1.3 NAD~+/NADH再生体系研究概况 | 第19-22页 |
| 1.3.1 NAD~+/NADH再生体系的应用 | 第19页 |
| 1.3.2 烟酰胺辅酶的稳定性 | 第19-20页 |
| 1.3.3 NAD~+/NADH再生途径 | 第20-22页 |
| 1.4 蛋白质的热稳定性改造 | 第22-25页 |
| 1.4.1 定向进化 | 第22-24页 |
| 1.4.2 理性设计 | 第24-25页 |
| 1.5 L-ABA合成途径关键酶简介 | 第25-30页 |
| 1.5.1 苏氨酸脱氨酶的研究概况 | 第26-27页 |
| 1.5.2 亮氨酸脱氢酶的研究概况 | 第27-29页 |
| 1.5.3 甲酸脱氢酶的研究概况 | 第29-30页 |
| 1.6 课题研究目标与内容 | 第30-33页 |
| 1.6.1 研究目标 | 第30页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第30-33页 |
| 第二章 基因克隆与菌株构建 | 第33-49页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-35页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第33页 |
| 2.2.2 菌株与质粒 | 第33-35页 |
| 2.2.3 培养基与培养条件 | 第35页 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 | 第35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-45页 |
| 2.3.1 基因组的提取 | 第36页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 2.3.3 质粒提取 | 第37页 |
| 2.3.4 PCR产物纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.5 DNA胶回收 | 第38页 |
| 2.3.6 DNA浓度的测定 | 第38-39页 |
| 2.3.7 重组菌的构建 | 第39-42页 |
| 2.3.8 重组菌的诱导表达 | 第42页 |
| 2.3.9 大肠杆菌超声破碎方法 | 第42页 |
| 2.3.10 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第42-44页 |
| 2.3.11 酶活测定 | 第44-45页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第45-47页 |
| 2.4.1 重组菌的表达 | 第45-47页 |
| 2.4.2 重组菌酶活 | 第47页 |
| 2.5 小结 | 第47-49页 |
| 第三章 苏氨酸脱氨酶结构改造 | 第49-73页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 实验材料 | 第49-51页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.2 菌株和质粒 | 第50页 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 | 第50-51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-58页 |
| 3.3.1 感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 3.3.2 质粒转化 | 第51-52页 |
| 3.3.3 菌落PCR | 第52页 |
| 3.3.4 定点突变 | 第52页 |
| 3.3.5 定点饱和突变 | 第52-53页 |
| 3.3.6 蛋白质纯化 | 第53-55页 |
| 3.3.7 蛋白质浓度的测定 | 第55页 |
| 3.3.8 酶学性质测定 | 第55-56页 |
| 3.3.9 高通量筛选方法构建 | 第56-57页 |
| 3.3.10 易错PCR | 第57-58页 |
| 3.3.11 理性设计 | 第58页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第58-70页 |
| 3.4.1 苏氨酸脱氨酶的纯化 | 第58-59页 |
| 3.4.2 高通量筛选方法的建立 | 第59-60页 |
| 3.4.3 易错PCR | 第60-63页 |
| 3.4.4 理性设计 | 第63-65页 |
| 3.4.5 突变体热稳定提高机制解析 | 第65-67页 |
| 3.4.6 组合突变 | 第67-68页 |
| 3.4.7 突变株G323D/F510L/T344A与野生型L-TD性质比较 | 第68-70页 |
| 3.5 小结 | 第70-73页 |
| 第四章 多酶催化反应制备L-2-氨基丁酸 | 第73-87页 |
| 4.1 引言 | 第73-74页 |
| 4.2 实验材料 | 第74页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第74页 |
| 4.2.2 菌株 | 第74页 |
| 4.2.3 主要仪器与设备 | 第74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-77页 |
| 4.3.1 HPLC检测方法 | 第75页 |
| 4.3.2 NADH浓度测定 | 第75-76页 |
| 4.3.3 NADH的影响因素 | 第76-77页 |
| 4.3.4 L-ABA合成体系的优化 | 第77页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第77-85页 |
| 4.4.1 NADH的影响因素 | 第77-80页 |
| 4.4.2 L-ABA合成体系的优化 | 第80-83页 |
| 4.4.3 改造后体系合成L-ABA | 第83-85页 |
| 4.5 小结 | 第85-87页 |
| 第五章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 5.1 总结 | 第87-88页 |
| 5.2 展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |