| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 杨树的生物学特性分布、地位发展概况以及主要虫害 | 第9-10页 |
| 1.1.1 杨树的生物学特性和分布 | 第9页 |
| 1.1.2 杨树在国民经济及林业中的地位和发展概况 | 第9页 |
| 1.1.3 杨树的主要虫害 | 第9-10页 |
| 1.1.4 杨树害虫的防治 | 第10页 |
| 1.2 几丁质酶作用机理和应用 | 第10-11页 |
| 1.2.1 几丁质酶的作用机理 | 第10页 |
| 1.2.2 几丁质酶的应用 | 第10-11页 |
| 1.3 RNAi的作用机理,特点以及在害虫防治中的应用 | 第11-14页 |
| 1.3.1 RNAi的定义 | 第11页 |
| 1.3.2 RNAi作用机理 | 第11页 |
| 1.3.3 RNAi特点 | 第11-13页 |
| 1.3.4 RNAi在昆虫中应用 | 第13-14页 |
| 1.3.5 RNAi在害虫防治中的应用 | 第14页 |
| 1.4 本实验的目的意义 | 第14-16页 |
| 2 分月扇舟蛾几丁质酶基因的克隆和生物信息学分析 | 第16-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 供试虫体和菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 常用溶液配置 | 第16页 |
| 2.1.3 试验设备 | 第16页 |
| 2.1.4 实验所需酶及试剂 | 第16-17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-20页 |
| 2.2.1 分月扇舟蛾总RNA的提取 | 第17页 |
| 2.2.2 反转录cDNA第一链的合成 | 第17-18页 |
| 2.2.3 分月扇舟蛾几丁质酶基因的全长获得 | 第18-19页 |
| 2.2.4 核苷酸测序 | 第19-20页 |
| 2.3 Chi基因的生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.4 结果与分析 | 第20-28页 |
| 2.4.1 分月扇舟蛾总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.4.2 分月扇舟蛾几丁质酶基因cDNA序列的扩增 | 第21页 |
| 2.4.3 分月扇舟蛾几丁质酶基因的序列分析 | 第21-22页 |
| 2.4.4 分月扇舟蛾几丁质酶基因的生物信息学分析 | 第22-28页 |
| 2.5 关于分月扇舟蛾的几丁质酶基因家族的讨论 | 第28页 |
| 2.6 本章小结 | 第28-29页 |
| 3 分月扇舟蛾几丁质酶基因dsRNA载体构建及杨树转化 | 第29-54页 |
| 3.1 试验材料 | 第29-31页 |
| 3.1.1 供试虫体,菌株 | 第29页 |
| 3.1.2 供试试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第29页 |
| 3.1.4 有关试剂的配制 | 第29-30页 |
| 3.1.5 有关培养基的配置 | 第30-31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-42页 |
| 3.2.1 几丁质酶基因RNAi载体构建策略 | 第31-33页 |
| 3.2.2 分月扇舟蛾总DNA的提取 | 第33页 |
| 3.2.3 目的基因的获得 | 第33-35页 |
| 3.2.4 植物表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.5 RNAi载体转化农杆菌 | 第36页 |
| 3.2.6 重组载体的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.7 抗生素的筛选 | 第37-38页 |
| 3.2.8 农杆菌介导法转化干涉载体pBI121-Chif-intron-Chir | 第38页 |
| 3.2.9 转基因杨树的PCR检测 | 第38-40页 |
| 3.2.10 荧光定量PCR检测Chi基因在山新杨中的表达 | 第40-42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-51页 |
| 3.3.1 分月扇舟蛾基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| 3.3.2 目的片段的扩增 | 第43页 |
| 3.3.3 中间载体pUC19-Chif-intron-Chir构建验证 | 第43-44页 |
| 3.3.4 RNAi植物表达载体pBI121-Chif-intron-Chir构建验证 | 第44-45页 |
| 3.3.5 RNAi植物表达载体pBI121-Chif-intron-Chir导入农杆菌的验证 | 第45-46页 |
| 3.3.6 卡那霉素,头孢霉素筛选浓度的测定 | 第46-49页 |
| 3.3.7 根癌农杆菌转化山新杨 | 第49-50页 |
| 3.3.8 转基因杨树总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 3.3.9 分月扇舟蛾的几丁质酶RNA片段在转基因杨树中的表达量 | 第51页 |
| 3.4 关于几丁质酶基因dsRNA转山新杨的讨论 | 第51-52页 |
| 3.4.1 杨树品种的确定 | 第51-52页 |
| 3.4.2 构建载体的内含子的确定 | 第52页 |
| 3.4.3 目标基因片段的选择 | 第52页 |
| 3.4.4 关于抗生素筛选 | 第52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 4 转基因植株的抗虫性研究 | 第54-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第54页 |
| 4.1.1 供试树种 | 第54页 |
| 4.1.2 供试昆虫 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 转dsRNA几丁质酶基因的山新杨抗分月扇舟蛾研究 | 第54页 |
| 4.2.2 转dsRNA几丁质酶基因的山新杨抗舞毒蛾研究 | 第54-55页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第55-59页 |
| 4.3.1 分月扇舟蛾总RNA的提取 | 第55页 |
| 4.3.2 几丁质酶基因在分月扇舟蛾内的表达量 | 第55-56页 |
| 4.3.3 转基因株系对舞毒蛾幼虫各龄历期和发育速率的影响 | 第56-57页 |
| 4.3.4 转基因株系对舞毒蛾幼虫体重的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.5 转基因株系对舞毒蛾幼虫死亡率的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.6 舞毒蛾幼虫取食行为和死亡症状 | 第59页 |
| 4.4 关于转基因杨树抗虫性的讨论 | 第59-60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
