| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-17页 |
| 1.1 甘薯病毒病害及其防治 | 第9-10页 |
| 1.2 RNA沉默与植物抗病毒 | 第10-12页 |
| 1.2.1 RNA沉默机制 | 第10页 |
| 1.2.2 植物RNA沉默抗病毒机制 | 第10-11页 |
| 1.2.3 病毒基因沉默抑制子 | 第11-12页 |
| 1.3 ami RNA抗病毒策略 | 第12-17页 |
| 1.3.1 ami RNA抗病毒策略的机制 | 第12页 |
| 1.3.2 ami RNA抗病毒策略的特点 | 第12-14页 |
| 1.3.2.1 抗性水平 | 第12-13页 |
| 1.3.2.2 抗性遗传 | 第13页 |
| 1.3.2.3 多病毒抗性 | 第13-14页 |
| 1.3.2.4 安全性 | 第14页 |
| 1.3.3 ami RNA抗病毒策略在植物上的应用 | 第14-17页 |
| 2 引言 | 第17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-29页 |
| 3.1 材料 | 第17-18页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第17页 |
| 3.1.2 供试植物 | 第17页 |
| 3.1.3 酶和试剂 | 第17-18页 |
| 3.2 方法 | 第18-29页 |
| 3.2.1 基本的分子生物学方法 | 第18-21页 |
| 3.2.1.1 植物总DNA的提取 | 第18-19页 |
| 3.2.1.2 PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| 3.2.1.3 PCR产物的酶切 | 第19页 |
| 3.2.1.4 目的片段的回收 | 第19-20页 |
| 3.2.1.5 目的片段与载体的连接 | 第20页 |
| 3.2.1.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20页 |
| 3.2.1.7 转化大肠杆菌 | 第20页 |
| 3.2.1.8 菌液PCR验证 | 第20-21页 |
| 3.2.1.9 大肠杆菌质粒提取 | 第21页 |
| 3.2.1.10重组质粒的PCR验证 | 第21页 |
| 3.2.1.11重组质粒的的酶切验证 | 第21页 |
| 3.2.2 hp RNA干扰载体的构建 | 第21-23页 |
| 3.2.2.1 p Bin19 Ri构建策略 | 第21-23页 |
| 3.2.2.2 引物设计 | 第23页 |
| 3.2.2.3 构建方法 | 第23页 |
| 3.2.3 植物表达载体构建 | 第23-24页 |
| 3.2.3.1 p Bin19 R3构建策略 | 第23页 |
| 3.2.3.2 引物设计 | 第23-24页 |
| 3.2.3.3 构建方法 | 第24页 |
| 3.2.4 ami RNA干扰载体构建 | 第24-26页 |
| 3.2.4.1 PBI121 ami R构建策略 | 第24页 |
| 3.2.4.2 构建方法 | 第24-26页 |
| 3.2.4.3 引物设计 | 第26页 |
| 3.2.5 植物表达载体的农杆菌转化 | 第26-28页 |
| 3.2.5.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 3.2.5.2 转化农杆菌 | 第27页 |
| 3.2.5.3 农杆菌菌液PCR鉴定 | 第27页 |
| 3.2.5.4 农杆菌质粒的提取 | 第27-28页 |
| 3.2.5.5 植物表达载体的酶切验证 | 第28页 |
| 3.2.6 农杆菌介导的烟草转化与转基因烟草的获得 | 第28-29页 |
| 3.2.6.1 受体材料的准备 | 第28页 |
| 3.2.6.2 农杆菌培养 | 第28页 |
| 3.2.6.3 侵染 | 第28页 |
| 3.2.6.4 共培养 | 第28页 |
| 3.2.6.5 选择培养 | 第28-29页 |
| 3.2.6.6 生根培养 | 第29页 |
| 3.2.6.7 炼苗移栽 | 第29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-36页 |
| 4.1 p Bin19 Ri载体及p Bin19 R3载体的构建与鉴定 | 第29-33页 |
| 4.2 ami RNA干扰载体的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| 4.2.1 ami RNA序列设计与合成 | 第33页 |
| 4.2.2 PBI121 ami R的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| 4.3 农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第35-36页 |
| 4.3.1 农杆菌中重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| 4.3.2 普通烟草外植体消毒方法的确定 | 第35页 |
| 4.3.3 卡那霉素浓度的确定 | 第35-36页 |
| 4.3.4 抗性植株的获得 | 第36页 |
| 5 结论与讨论 | 第36-38页 |
| 5.1 结论 | 第36页 |
| 5.2 讨论 | 第36-37页 |
| 5.3 展望 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| 英文摘要 | 第43-44页 |
