| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第1章 引言 | 第14-46页 |
| 1.1 膜蛋白的晶体学研究 | 第14-30页 |
| 1.1.1 膜蛋白样品的获取 | 第16-19页 |
| 1.1.2 膜蛋白的结晶方法 | 第19-22页 |
| 1.1.2.1 基于去污剂的结晶方法 | 第19-21页 |
| 1.1.2.2 基于脂类的结晶方法 | 第21-22页 |
| 1.1.3 X射线晶体学 | 第22-30页 |
| 1.1.3.1 衍射的几何原理 | 第22-25页 |
| 1.1.3.2 结构因子和电子密度 | 第25-26页 |
| 1.1.3.3 相位问题 | 第26-30页 |
| 1.2 革兰氏阴性细菌内膜上的蛋白质转运系统 | 第30-45页 |
| 1.2.1 SecYEG转运系统 | 第32-41页 |
| 1.2.1.1 Sec转运系统的两种分选定位途径。 | 第33-34页 |
| 1.2.1.2 SecYEG转运途径中的相关因子 | 第34-39页 |
| 1.2.1.3 SecYEG的结构特点和转运模型 | 第39-41页 |
| 1.2.2 Tat系统 | 第41-43页 |
| 1.2.3 YidC家族转运系统 | 第43-45页 |
| 1.2.3.1 细菌中的YidC转运系统 | 第43-44页 |
| 1.2.3.2 线粒体和叶绿体中的YidC转运系统 | 第44-45页 |
| 1.3 本课题的选题背景和意义 | 第45-46页 |
| 第2章 YidC的晶体结构研究 | 第46-88页 |
| 2.1 本章引言 | 第46-47页 |
| 2.2 YidC的表达与纯化 | 第47-55页 |
| 2.2.1 本节引言 | 第47-49页 |
| 2.2.2 材料和方法 | 第49-54页 |
| 2.2.2.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 2.2.2.2 表达载体的构建 | 第50页 |
| 2.2.2.3 表达体系的建立 | 第50-51页 |
| 2.2.2.4 纯化体系的建立 | 第51-54页 |
| 2.2.3 本节结果讨论 | 第54-55页 |
| 2.3 YidC的晶体筛选 | 第55-60页 |
| 2.3.1 本节引言 | 第55-56页 |
| 2.3.2 材料和方法 | 第56-57页 |
| 2.3.2.1 实验材料 | 第56页 |
| 2.3.2.2 去污剂筛选 | 第56页 |
| 2.3.2.3 胰蛋白酶酶切样品筛选 | 第56-57页 |
| 2.3.2.4 其它筛选方法 | 第57页 |
| 2.3.3 本节结果讨论 | 第57-60页 |
| 2.4 YidC的晶体优化 | 第60-69页 |
| 2.4.1 本节引言 | 第60页 |
| 2.4.2 材料和方法 | 第60-68页 |
| 2.4.2.1 实验材料 | 第60页 |
| 2.4.2.2 常规优化 | 第60页 |
| 2.4.2.3 晶体处理 | 第60-61页 |
| 2.4.2.4 TmYidC蛋白改造 | 第61-68页 |
| 2.4.3 本节结果讨论 | 第68-69页 |
| 2.5 TmYidCP1的晶体结构解析 | 第69-76页 |
| 2.5.1 本节引言 | 第69页 |
| 2.5.2 材料与方法 | 第69-76页 |
| 2.5.2.1 实验材料 | 第69页 |
| 2.5.2.2 表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 2.5.2.3 TmYidCP1的表达纯化 | 第70-71页 |
| 2.5.2.4 TmYidCP1的晶体生长 | 第71-72页 |
| 2.5.2.5 TmYidCP1的数据采集与结构解析 | 第72-76页 |
| 2.6 TmYidC晶体的数据收集和结构解析 | 第76-84页 |
| 2.6.1 数据收集与结构解析 | 第76-80页 |
| 2.6.2 TmYidC结构分析 | 第80-84页 |
| 2.7 本章讨论 | 第84-85页 |
| 2.8 本章附 | 第85-88页 |
| 第3章 基于晶体结构的YidC功能研究 | 第88-114页 |
| 3.1 本章引言 | 第88-90页 |
| 3.2 TM3-TM5界面作为YidC底物的出口 | 第90-95页 |
| 3.2.1 本节引言 | 第90-91页 |
| 3.2.2 材料与方法 | 第91-93页 |
| 3.2.2.1 实验材料 | 第91页 |
| 3.2.2.2 TM3-TM5界面及TM2-TM6界面与Pf3的体内光交联实验 | 第91-93页 |
| 3.2.3 本节结果讨论 | 第93-95页 |
| 3.3 α.螺旋束Ⅰ和Ⅱ在周质侧的运动性对于YidC的活性是必需的 | 第95-104页 |
| 3.3.1 本节引言 | 第95-96页 |
| 3.3.2 材料和方法 | 第96-102页 |
| 3.3.2.1 实验材料 | 第96页 |
| 3.3.2.2 敲除菌的构建 | 第96-100页 |
| 3.3.2.3 表型质粒的构建 | 第100页 |
| 3.3.2.4 α2螺旋束Ⅰ、Ⅱ上半胱氨酸突变体的表型 | 第100-102页 |
| 3.3.3 本节结果讨论 | 第102-104页 |
| 3.4 P2 loop区域保守负电荷氨基酸的表型分析 | 第104-109页 |
| 3.4.1 本节引言 | 第104-105页 |
| 3.4.2 材料与方法 | 第105-107页 |
| 3.4.2.1 实验材料 | 第105-106页 |
| 3.4.2.2 P2 loop上特定位点维持负电性对于活性YidC是必需的 | 第106-107页 |
| 3.4.3 本节结果讨论 | 第107-109页 |
| 3.5 本章讨论 | 第109-110页 |
| 3.6 本章附 | 第110-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第126页 |
