| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 第一章 材料与仪器 | 第10-17页 |
| 1.1 细胞 | 第10页 |
| 1.2 质粒和菌株 | 第10页 |
| 1.3 主要实验试剂及配制方法 | 第10-15页 |
| 1.3.1 主要实验试剂 | 第10-11页 |
| 1.3.2 主要试剂配制方法 | 第11-15页 |
| 1.4 实验仪器和设备 | 第15-17页 |
| 第二章 实验方法 | 第17-30页 |
| 2.1 重组质粒的构建 | 第17-18页 |
| 2.1.1 引物设计与合成 | 第17页 |
| 2.1.2 目的基因扩增及载体构建 | 第17-18页 |
| 2.2 重组质粒扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.1 重组质粒转化大肠杆菌 DH5α | 第18-19页 |
| 2.3 电击转化毕赤酵母菌株GS115及阳性菌株筛选 | 第19-20页 |
| 2.4 毕赤酵母GS115重组子鉴定 | 第20-21页 |
| 2.4.1 毕赤酵母全基因的提取 | 第20-21页 |
| 2.4.2 PCR鉴定重组子 | 第21页 |
| 2.5 阳性菌株Mut表型鉴定 | 第21页 |
| 2.6 多拷贝阳性菌株的筛选与鉴定 | 第21-22页 |
| 2.7 诱导表达目的蛋白 | 第22页 |
| 2.8 TCA沉淀、SDS-PAGE检测表达产物 | 第22-24页 |
| 2.8.1 TCA法沉淀蛋白 | 第22-23页 |
| 2.8.2 SDS-PAGE检测表达产物 | 第23-24页 |
| 2.9 Western blot鉴定目的蛋白 | 第24-25页 |
| 2.10 目的蛋白的纯化 | 第25-27页 |
| 2.11 融合蛋白的生物活性检测 | 第27-30页 |
| 2.11.1 融合蛋白的抑菌活性检测 | 第27-28页 |
| 2.11.2 融合蛋白对人卵巢癌细胞生长增殖作用 | 第28-29页 |
| 2.11.3 融合蛋白对Hela细胞生长增殖的作用 | 第29-30页 |
| 第三章 实验结果 | 第30-41页 |
| 3.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第30-33页 |
| 3.1.1 目的基因获取 | 第30-32页 |
| 3.1.2 重组质粒构建及鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2 重组酵母菌株的筛选及鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 重组酵母菌株mut表型鉴定 | 第34-35页 |
| 3.4 多拷贝菌株筛选及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.5 阳性菌株诱导表达产物的检测及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.6 融合蛋白纯化结果 | 第37-38页 |
| 3.7 融合蛋白生物活性检测 | 第38-41页 |
| 3.7.1 融合蛋白抑菌活性检测 | 第38-39页 |
| 3.7.2 融合蛋白对卵巢癌细胞SKOV3生长增殖作用检测 | 第39-40页 |
| 3.7.3 融合蛋白对人宫颈癌Hela细胞生长增殖作用检测 | 第40-41页 |
| 第四章 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 毕赤酵母表达系统的探讨 | 第41页 |
| 4.2 融合蛋M-IL-2(88Arg,125Ala)在毕赤酵母中表达效果探讨 | 第41-42页 |
| 4.3 融合蛋白质纯化方法的探讨 | 第42-43页 |
| 4.4 融合蛋白的生物活性探讨 | 第43-44页 |
| 第五章 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 文献综述 | 第49-61页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
