| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一部分 香菇 C91-3 菌 LP1-PI3K 样结构域原核表达载体的构建及序列分析 | 第16-26页 |
| 1. 材料 | 第16-17页 |
| 1.1 质粒与菌株 | 第16页 |
| 1.2 主要仪器及试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 实验所需引物 | 第17页 |
| 2. 方法 | 第17-20页 |
| 2.1 LP1-PI3K 基因的获得 | 第17-18页 |
| 2.2 引物设计和 PCR 扩增特异性基因片段 | 第18页 |
| 2.3 克隆载体 pMD19-T-LP1-PI3K 的构建及筛选 | 第18-19页 |
| 2.4 表达载体 pET-32a-LP1-PI3K 的构建及筛选 | 第19-20页 |
| 2.5 LP1-PI3K 样蛋白结构分析 | 第20页 |
| 3. 结果 | 第20-26页 |
| 3.1 LP1-PI3K 基因的获得 | 第20-21页 |
| 3.2 克隆载体 pMD19-T-LP1-PI3K 的构建及鉴定 | 第21-22页 |
| 3.3 表达载体 pET-32a-LP1-PI3K 的构建及鉴定 | 第22-24页 |
| 3.4 LP1-PI3K 样蛋白结构分析 | 第24-26页 |
| 第二部分 香菇 C91-3 菌 LP1-PI3K 样蛋白在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中的表达分离和纯化 | 第26-32页 |
| 1. 材料 | 第26-27页 |
| 1.1 主要仪器 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2. 方法 | 第27-30页 |
| 2.1 LP1-PI3K 样蛋白在 E.coli Rosetta-gami(DE3) 中的诱导表达 | 第27页 |
| 2.2 Western-blot 分析 | 第27-28页 |
| 2.3 LP1-PI3K 样蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.4 LP1-PI3K 样蛋白(包涵体)的尿素梯度复性 | 第29-30页 |
| 3. 结果 | 第30-32页 |
| 3.1 LP1-PI3K 样蛋白在 E.coli Rosetta-gami(DE3) 中的诱导表达 | 第30页 |
| 3.2 Western-blot 分析 | 第30-31页 |
| 3.3 LP1-PI3K 样蛋白纯化后 SDS-PAGE 电泳结果及Western-blot 鉴定 | 第31-32页 |
| 第三部分 香菇 C91-3 菌 LP1-PI3K 样蛋白抗肿瘤活性及作用机制的初步研究 | 第32-42页 |
| 1. 材料 | 第32-33页 |
| 1.1 主要仪器 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 1.3 细胞株 | 第32-33页 |
| 2. 方法 | 第33-35页 |
| 2.1 人肺癌 A549 细胞的培养 | 第33页 |
| 2.2 MTT 法测定 LP1-PI3K 样蛋白的抑瘤率 | 第33页 |
| 2.3 流式细胞仪测定 LP1-PI3K 样蛋白对肿瘤细胞的影响 | 第33-34页 |
| 2.4 透射电镜观察细胞亚显微结构 | 第34页 |
| 2.5 Western-blot 分析 LC3 表达 | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35-42页 |
| 3.1 MTT 法测定 LP1-PI3K 样蛋白的对细胞的抑制率 | 第35-36页 |
| 3.2 流式细胞仪测定 LP1-PI3K 样蛋白对肿瘤细胞的影响 | 第36-39页 |
| 3.3 透射电镜观察细胞亚显微结构 | 第39-41页 |
| 3.4 Western-blot 分析 LC3 表达 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 综述 | 第49-63页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
