| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 生物钟及其相关概念 | 第13-15页 |
| 2 授时因子 | 第15-17页 |
| 2.1 光照授时因子 | 第16页 |
| 2.2 温度授时因子 | 第16页 |
| 2.3 饮食授时因子 | 第16-17页 |
| 2.4 磁场授时因子 | 第17页 |
| 3 生物钟基因 | 第17-21页 |
| 3.1 周期蛋白基因 | 第17-18页 |
| 3.2 隐花色素基因 | 第18-19页 |
| 3.3 永恒蛋白基因和逾时蛋白基因 | 第19页 |
| 3.4 周期循环蛋白基因 | 第19-20页 |
| 3.5 时钟蛋白基因 | 第20页 |
| 3.6 旋转蛋白基因 | 第20页 |
| 3.7 双时蛋白基因 | 第20-21页 |
| 4 生物钟分子调控信号途径 | 第21-26页 |
| 4.1 哺乳动物生物钟环路 | 第21-22页 |
| 4.2 斑马鱼生物钟环路 | 第22-24页 |
| 4.3 果蝇生物钟环路 | 第24-25页 |
| 4.4 大红斑蝶生物钟环路 | 第25-26页 |
| 5 家蚕生物钟研究的现状 | 第26-28页 |
| 6 细胞中生物钟研究的进展 | 第28-29页 |
| 7 生物钟研究的前景 | 第29-30页 |
| 第二章 研究目标与内容 | 第30-33页 |
| 1 研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 2 研究内容 | 第31-32页 |
| 2.1 确认家蚕培养细胞生物钟核心负反馈环路对光授时因子的作用方式 | 第31页 |
| 2.2 确认家蚕培养细胞生物钟核心负反馈环路对温度授时因子的响应 | 第31页 |
| 2.3 建立家蚕培养细胞研究温度授时因子作用机制的技术平台 | 第31-32页 |
| 3 研究技术路线 | 第32-33页 |
| 第三章 主要试剂与常用实验方法 | 第33-47页 |
| 1 常用材料与试剂 | 第33-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第33页 |
| 1.2 主要生化试剂 | 第33-34页 |
| 1.3 主要试剂盒 | 第34页 |
| 1.4 常用溶液以及缓冲液配制 | 第34-35页 |
| 2 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 3 常用实验方法 | 第36-47页 |
| 3.1 细胞传代培养及相关操作 | 第36-39页 |
| 3.2 细胞总RNA的抽提 | 第39页 |
| 3.3 基因组DNA消化 | 第39-40页 |
| 3.4 RNA反转录 | 第40页 |
| 3.5 PCR扩增反应程序及加样体系 | 第40-41页 |
| 3.6 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第41页 |
| 3.7 实时定量PCR(Real Time PCR) | 第41-42页 |
| 3.8 Western-Blotting | 第42-46页 |
| 3.9 免疫荧光 | 第46-47页 |
| 第四章 温度与光授时信号途径的探索与完善 | 第47-57页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 1.1 供试细胞系为家蚕BmN细胞系 | 第48页 |
| 1.2 多克隆抗体的制备 | 第48-49页 |
| 1.3 免疫荧光操作方法 | 第49页 |
| 1.4 总RNA提取及cDNA第1条链的合成 | 第49页 |
| 1.5 基因表达谱分析 | 第49-50页 |
| 1.6 基因表达数据处理方法 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-55页 |
| 2.1 各种光节律和温度节律处理下细胞的生长状况 | 第50-51页 |
| 2.2 生物钟蛋白亚细胞定位 | 第51-54页 |
| 2.3 瞬时高温刺激对生物钟基因的影响 | 第54-55页 |
| 3 讨论与小结 | 第55-57页 |
| 3.1 家蚕BmN细胞中光授时信号途径的整合以及完善 | 第55页 |
| 3.2 光授时信号途径中反馈环路的进一步证实 | 第55-56页 |
| 3.3 家蚕BmN细胞中的生物钟基因能够响应温度信号 | 第56页 |
| 3.4 BmN细胞中的温度信号传输途径有待进一步确认 | 第56-57页 |
| 第五章 温度循环对家蚕BmN细胞生物钟基因的影响 | 第57-73页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 1.1 供试细胞系为家蚕BmN细胞系 | 第57-58页 |
| 1.2 总RNA提取及cDNA第1条链的合成 | 第58页 |
| 1.3 细胞总蛋白提取方法 | 第58页 |
| 1.4 基因表达谱分析 | 第58页 |
| 1.5 基因表达数据处理方法 | 第58-59页 |
| 1.6 Western Blotting的操作方法 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-71页 |
| 2.1 生物钟蛋白 | 第59-60页 |
| 2.2 各种温度节律处理下细胞的生长状况 | 第60-61页 |
| 2.3 恒明条件下不同温度节律下生物钟基因表达变化 | 第61-64页 |
| 2.4 恒暗条件下不同温度节律下生物钟基因表达变化 | 第64-67页 |
| 2.5 在DD、20℃：30℃温度节律下生物钟基因及其蛋白表达的变化 | 第67-71页 |
| 3 讨论与小结 | 第71-73页 |
| 3.1 家蚕BmN细胞在恒明、12 h 26℃：12 h 28℃温度节律下生物钟蛋白表达没 出 因水 相一致的振荡节律 | 第71页 |
| 3.2 家蚕BmN细胞在恒明或者恒暗、相同温度节律下生物钟基因振荡节律不同 | 第71-72页 |
| 3.3 家蚕BmN细胞在恒暗、12 h 20℃：12 h 30℃温度节律下能够使生物钟因及其蛋白质产生一致的节律振荡 | 第72页 |
| 3.4 温度授时因子的信号途径有待进一步确定 | 第72-73页 |
| 第六章 综合结论 | 第73-76页 |
| 1 家蚕BmN细胞中生物钟基因的亚细胞定位 | 第73-74页 |
| 2 瞬时高温刺激能够使得家蚕BmN细胞响应温度信号 | 第74页 |
| 3 温度循环模式的摸索 | 第74-75页 |
| 4 家蚕BmN细胞中,Cry1、Cry2、Per可能在温度信号输入途径中起重要作用 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 研究生期间发表文章 | 第86-87页 |
| 资助项目 | 第87-88页 |
| 附录 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
