| 致谢 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 志贺菌的病原学特性 | 第10-11页 |
| 1.1.1 志贺菌的形态学及染色特性 | 第10页 |
| 1.1.2 志贺菌的培养特性 | 第10页 |
| 1.1.3 志贺菌的生化特性 | 第10-11页 |
| 1.1.4 志贺菌的分类 | 第11页 |
| 1.2 志贺菌的致病性 | 第11-13页 |
| 1.2.1 志贺菌对人及多种动物的致病性 | 第12-13页 |
| 1.3 志贺菌的致病机理及毒力基因 | 第13-16页 |
| 1.3.1 志贺菌致病机制 | 第13-15页 |
| 1.3.2 志贺菌的毒力基因 | 第15-16页 |
| 1.4 志贺菌的免疫情况 | 第16页 |
| 1.4.1 先天免疫 | 第16页 |
| 1.4.2 细胞免疫 | 第16页 |
| 1.4.3 体液免疫 | 第16页 |
| 1.5 志贺菌的检测方法 | 第16-17页 |
| 1.5.1 细菌培养法和生化鉴定法 | 第16页 |
| 1.5.2 PCR检测方法 | 第16-17页 |
| 1.5.3 RAPD方法 | 第17页 |
| 1.5.4 免疫学方法 | 第17页 |
| 1.5.5 化学鉴定法 | 第17页 |
| 1.5.6 硝酸纤维素膜富集法检测志贺菌方法 | 第17页 |
| 1.6 志贺菌的疫苗研制 | 第17-18页 |
| 1.6.1 亚单位疫苗 | 第18页 |
| 1.6.2 灭活疫苗 | 第18页 |
| 1.6.3 活疫苗 | 第18页 |
| 1.6.4 联合疫苗 | 第18页 |
| 1.7 志贺菌有关抗体制备进展 | 第18-20页 |
| 2 鸡源志贺菌IpaC基因的原核表达及纯化 | 第20-29页 |
| 引言 | 第20页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-25页 |
| 2.1.2 菌株、引物 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第21-23页 |
| 2.1.6 重组表达质粒在BL21表达 | 第23-24页 |
| 2.1.7 Ipa C蛋白的纯化 | 第24页 |
| 2.1.8 Western Blot检测 | 第24-25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-27页 |
| 2.2.1 p ET32a-Ipa C/BL21(DE3)的表达菌PCR鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.2.2 纯化后Ipa C蛋白的SDS-PAGE鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.2.3 纯化后Ipa C蛋白的Western Blot检测结果 | 第27页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第27-29页 |
| 2.3.1 Ipa C蛋白分子质量 | 第27页 |
| 2.3.2 Ipa C蛋白纯化效果 | 第27-29页 |
| 3 IpaC蛋白抗原制备及免疫 | 第29-36页 |
| 引言 | 第29页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-31页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第29-30页 |
| 3.1.5 Ipa C抗原的制备 | 第30页 |
| 3.1.5.1 透析袋的处理 | 第30页 |
| 3.1.5.2 Ipa C蛋白透析 | 第30页 |
| 3.1.6 Ipa C免疫原的制备 | 第30页 |
| 3.1.7 Ipa C抗原的免疫 | 第30页 |
| 3.1.8 间接ELISA检测小鼠多克隆抗体（p Ab）效价 | 第30-31页 |
| 3.1.8.1 包被抗原 | 第30页 |
| 3.1.8.2 封闭 | 第30-31页 |
| 3.1.9 间接竞争ELISA测定小鼠多克隆抗体（p Ab）敏感性 | 第31页 |
| 3.2 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.2.1 小鼠免疫效果 | 第31-32页 |
| 3.2.2 间接ELISA测定四免后小鼠多克隆抗体（p Ab）效价结果 | 第32-33页 |
| 3.2.3 间接竞争ELISA测定四免后小鼠多克隆抗体（p Ab）敏感性结果 | 第33-34页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第34-36页 |
| 3.3.1 小鼠免疫效果 | 第34页 |
| 3.3.2 小鼠的敏感性 | 第34页 |
| 3.3.3 四免后免疫效果降低 | 第34-36页 |
| 4 IpaC蛋白单克隆抗体的制备 | 第36-47页 |
| 引言 | 第36页 |
| 4.1 材料与方法 | 第36-42页 |
| 4.1.1 实验动物及骨髓瘤细胞 | 第36页 |
| 4.1.2 菌株 | 第36页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第36-37页 |
| 4.1.5 溶液配制 | 第37页 |
| 4.1.6 小鼠SP2/0 骨髓瘤细胞的复苏与培养 | 第37-38页 |
| 4.1.7 细胞融合小鼠的选择 | 第38页 |
| 4.1.8 细胞融合小鼠的加强免疫 | 第38页 |
| 4.1.9 细胞融合小鼠脾细胞的分离 | 第38-39页 |
| 4.1.10 细胞融合 | 第39页 |
| 4.1.11 饲养细胞（腹腔巨噬细胞）制备 | 第39页 |
| 4.1.12 杂交瘤细胞阳性孔的筛选 | 第39-40页 |
| 4.1.13 杂交瘤细胞阳性孔的克隆 | 第40页 |
| 4.1.14 杂交瘤细胞的冻存 | 第40页 |
| 4.1.15 杂交瘤细胞的复苏 | 第40页 |
| 4.1.16 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）制备 | 第40-41页 |
| 4.1.17 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）纯化 | 第41页 |
| 4.1.18 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）亚型鉴定 | 第41页 |
| 4.1.19 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）效价测定 | 第41-42页 |
| 4.1.20 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）蛋白免疫印迹（Western bolt）鉴定 | 第42页 |
| 4.2 结果与分析 | 第42-45页 |
| 4.2.1 SP2/0 骨髓瘤细胞融合前细胞形态 | 第42-43页 |
| 4.2.2 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）亚型鉴定结果 | 第43页 |
| 4.2.3 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）与细胞上清效价测定结果 | 第43-44页 |
| 4.2.4 鼠源Ipa C单克隆抗体（m Ab）蛋白免疫印迹（Western bolt）鉴定结果 | 第44-45页 |
| 4.3 讨论与分析 | 第45-47页 |
| 4.3.1 小鼠免疫前的加强免疫 | 第45页 |
| 4.3.2 细胞融合过程中融合剂的选择 | 第45页 |
| 4.3.3 杂交瘤细胞阳性孔的筛选 | 第45-46页 |
| 4.3.4 单克隆抗体的大量制备 | 第46-47页 |
| 5 鸡肠上皮细胞IpaC蛋白受体分子量的初步测定 | 第47-52页 |
| 引言 | 第47页 |
| 5.1 材料与方法 | 第47-49页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第47页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第47页 |
| 5.1.5 鸡胚处理 | 第47页 |
| 5.1.6 鸡肠上皮组织的提取 | 第47-48页 |
| 5.1.7 鸡肠上皮组织的研磨处理 | 第48页 |
| 5.1.8 鸡肠上皮细胞蛋白的提取 | 第48页 |
| 5.1.9 鸡肠上皮细胞总蛋白的浓度测定 | 第48页 |
| 5.1.10 鸡肠上皮细胞受体蛋白的SDS-PAGE分析 | 第48页 |
| 5.1.11 鸡肠上皮细胞Ipa C受体蛋白的铺覆蛋白印迹测定 | 第48-49页 |
| 5.2 结果与分析 | 第49-50页 |
| 5.2.1 鸡肠上皮细胞受体蛋白浓度测定 | 第49页 |
| 5.2.2 鸡肠上皮细胞受体蛋白SDS-PAGE分析结果 | 第49页 |
| 5.2.3 鸡肠上皮细胞受体蛋白的铺覆蛋白印迹测定结果 | 第49-50页 |
| 5.3 结论与讨论 | 第50-52页 |
| 5.3.1 受体蛋白的提取方法 | 第50页 |
| 5.3.2 铺覆蛋白印迹检测方法 | 第50-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| Abstract | 第58-59页 |
