摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-10页 |
缩略词 | 第13-14页 |
绪论 | 第14-18页 |
1. 特异性针对 LAT 分子的 siRNA 序列筛选及干扰效果鉴定 | 第18-26页 |
1.1 材料与方法 | 第18-19页 |
1.1.1 siRNA 序列 | 第18-19页 |
1.1.2 主要仪器和试剂 | 第19页 |
1.2 实验方法和步骤 | 第19-22页 |
1.2.1 siRNA 序列的设计 | 第19-20页 |
1.2.2 siRNA 转染 Jurkat 细胞株及 Western blot 鉴定干扰效果 | 第20-21页 |
1.2.3 siRNA 转染 PBMC 细胞及 Western blot 鉴定干扰效果 | 第21-22页 |
1.2.4 Amaxa 电转仪操作程序 | 第22页 |
1.3 结果 | 第22-23页 |
1.4 讨论 | 第23-26页 |
2. LAT 分子缺失对 T 细胞增殖和活化的影响 | 第26-34页 |
2.1 材料 | 第27页 |
2.2 实验方法和步骤 | 第27-29页 |
2.2.1 外周血单个核细胞(PBMCS)分离、转染及活化 | 第27-28页 |
2.2.2 双抗夹心法检测血清细胞因子含量 | 第28-29页 |
2.2.3 3H-TdR 法检测细胞增殖 | 第29页 |
2.3 结果 | 第29-31页 |
2.4 讨论 | 第31-34页 |
3.LAT 分子缺失对 TCR 信号转导通路相关蛋白活化的影响 | 第34-40页 |
3.1 材料 | 第34-35页 |
3.2 实验方法和步骤 | 第35-36页 |
3.2.1 Western blot 检测磷酸化表达谱变化 | 第35页 |
3.2.2 胞内钙离子内流检测 | 第35-36页 |
3.3 结果 | 第36-37页 |
3.4 讨论 | 第37-40页 |
4 LAT 分子缺失对 T 细胞分化的影响 | 第40-45页 |
4.1 材料 | 第40-41页 |
4.1.1 主要仪器 | 第40-41页 |
4.2 实验方法和步骤 | 第41-43页 |
4.2.1 RNA 抽提及逆转录 | 第41页 |
4.2.2 Realtime PCR 检测 Th2 分化相关基因表达 | 第41-43页 |
4.2.3 ELISA 方法检测培养上清中 IFN- 的表达 | 第43页 |
4.3 结果 | 第43-44页 |
4.4 讨论 | 第44-45页 |
5. LAT 分子缺失导致 T 细胞活化异常的分子机制探讨 | 第45-55页 |
5.1 材料 | 第45-46页 |
5.2 实验方法和步骤 | 第46-48页 |
5.2.1 脂筏提取鉴定 | 第46页 |
5.2.2 人 T 细胞分选试剂盒 | 第46-47页 |
5.2.3 Western 检测 CD28 相关信号通路蛋白磷酸化水平 | 第47页 |
5.2.4 免疫荧光方法检测胞内脂类小分子 PIP3 水平 | 第47-48页 |
5.3 结果 | 第48-52页 |
5.4 讨论 | 第52-55页 |
6.LAT 分子缺失对 T 细胞活化相关转录因子的研究机制探讨 | 第55-69页 |
6.1 材料 | 第56-58页 |
6.2 实验方法和步骤 | 第58-62页 |
6.2.1 质粒转化 | 第58-62页 |
6.3 结果 | 第62-66页 |
6.4 讨论 | 第66-69页 |
全文结论 | 第69-70页 |
LAT 分子参与外周 T 细胞活化和分化的调节机制模式图 | 第70-81页 |
综述:基因组学时代的免疫学研究 | 第81-98页 |
致谢 | 第98-99页 |
攻读博士期间发表的文章 | 第99-100页 |
参考文献 | 第100-106页 |