| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 文章综述 | 第9-19页 |
| ·TILLING 技术研究进展 | 第9-12页 |
| ·单链特异的核酸内切酶研究进展 | 第12-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第14-17页 |
| ·立题依据 | 第17-19页 |
| 第二章 芹菜CELI 酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第19-34页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·载体和菌株 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-27页 |
| ·芹菜中CEL I 基因的克隆 | 第19-21页 |
| ·表达载体构建及鉴定 | 第21-23页 |
| ·pPIC9K-CELI 表达载体构建 | 第23页 |
| ·pPICZαB-CELI 表达载体构建 | 第23页 |
| ·电转化及重组酵母菌的筛选 | 第23-25页 |
| ·重组载体的线性化 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母转化子的筛选及Mut 表型鉴定 | 第25页 |
| ·重组菌的基因组DNA 的PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·诱导表达蛋白的SDS-PAGE 电泳分析及 Western Blotting 鉴定 | 第26-27页 |
| ·目的蛋白的纯化及活性鉴定 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·芹菜中CEL I 基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·芹菜总RNA 的提取 | 第27页 |
| ·CEL I 基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·表达载体的构建及序列分析 | 第28-29页 |
| ·表达载体pPIC9K-CELI 的构建结果 | 第28-29页 |
| ·表达载体pPICZαB-CELI 的构建结果 | 第29页 |
| ·重组酵母菌落中目的基因的 PCR 鉴定 | 第29-30页 |
| ·诱导表达的蛋白电泳结果 | 第30-31页 |
| ·Western Blotting 鉴定结果分析 | 第31-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 芹菜中CEL I 酶的提取及其在筛选大豆疫霉突变体库中 PsPMA1 基因突变体的应用 | 第34-39页 |
| ·芹菜中CEL I 酶的粗提取及活性分析 | 第34-36页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·芹菜中CEL I 酶的粗提取方法 | 第34页 |
| ·芹菜中的CEL I 酶的SDS-PAGE 检测 | 第34页 |
| ·含错配的异源杂合双链DNA 的形成 | 第34-36页 |
| ·CEL I 酶粗提液的活性检测 | 第36页 |
| ·CEL I 酶在筛选大豆疫霉突变体库中PsPMA1 基因突变体的应用 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-38页 |
| ·CEL I 酶粗提液的活性检测结果 | 第37-38页 |
| ·CEL I 酶应用于 PsPMA1 基因突变体筛选的初步结果 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 结论与创新点 | 第39-40页 |
| ·结论 | 第39页 |
| ·创新点 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录 | 第44-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
