摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-26页 |
·脂肪酸α-双加氧酶(alpha-Dioxygenase)的研究进展 | 第12-18页 |
·植物脂肪酸α-双加氧酶(alpha-Dioxygenase)的发现 | 第12-14页 |
·植物脂肪酸α-双加氧酶(alpha-Dioxygenase)的催化性质 | 第14-15页 |
·alpha-Dioxygenas 的生物学功能与表达模式 | 第15-18页 |
·毕赤酵母表达系统 | 第18-22页 |
·毕赤酵母表达系统的构成与特点 | 第19-20页 |
·影响目的基因在毕赤酵母中表达的因素 | 第20-22页 |
·实时荧光定量PCR 技术的发展及应用 | 第22-24页 |
·实时定量PCR 的基本原理 | 第23页 |
·实时荧光定量PCR 技术的应用 | 第23-24页 |
·立题依据和研究目的 | 第24-26页 |
第二章 拟南芥Alpha-dioxygenase 2 在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定 | 第26-39页 |
·材料 | 第26-29页 |
·拟南芥AtDOX2 的cDNA | 第26页 |
·质粒载体 | 第26页 |
·宿主菌 | 第26页 |
·实验材料及试剂盒 | 第26页 |
·实验试剂 | 第26-28页 |
·毕赤酵母表达的溶液及培养基 | 第28页 |
·引物 | 第28-29页 |
·实验方法 | 第29-33页 |
·AtDOX2 基因的扩增及重组表达载体的构建 | 第29-31页 |
·重组表达载体电转化及酵母阳性重组子的筛选 | 第31页 |
·重组转化子的鉴定 | 第31-32页 |
·目的蛋白的诱导表达 | 第32-33页 |
·结果与分析 | 第33-37页 |
·AtDOX2 酵母表达载体的构建 | 第33页 |
·AtDOX2 表达菌株的筛选 | 第33-34页 |
·AtDOX2 表达和诱导时间的优化 | 第34-35页 |
·AtDOX2 的分离纯化 | 第35页 |
·AtDOX2 的过氧化物酶活性分析 | 第35-36页 |
·AtDOX2 的双加氧酶活性分析 | 第36-37页 |
·讨论 | 第37-39页 |
第三章 小麦中Alpha-dioxygenase 的表达分析 | 第39-45页 |
·材料 | 第39页 |
·植物材料 | 第39页 |
·主要试剂 | 第39页 |
·主要仪器 | 第39页 |
·引物 | 第39页 |
·试验方法 | 第39-41页 |
·植物材料胁迫的处理 | 第39-40页 |
·RNA 的提取与cDNA 的合成 | 第40页 |
·小麦DOX 基因表达水平定量 | 第40页 |
·数据的处理 | 第40-41页 |
·结果与分析 | 第41-43页 |
·NaCl 胁迫下TaDOX 的表达 | 第41-42页 |
·PEG8000 胁迫下TaDOX 的表达 | 第42-43页 |
·讨论 | 第43-45页 |
第四章 玉米中Alpha-dioxygenase 基因的克隆及生物信息学分析 | 第45-59页 |
·材料 | 第45页 |
·植物材料 | 第45页 |
·菌株和载体 | 第45页 |
·主要试剂 | 第45页 |
·计算机分析软件 | 第45页 |
·试验方法 | 第45-48页 |
·RNA 的提取和cDNA 第一链的合成 | 第45-46页 |
·玉米DOX 基因的克隆 | 第46-47页 |
·大肠杆菌感受态的制备及连接产物的转化 | 第47-48页 |
·结果与分析 | 第48-57页 |
·RT-PCR 扩增ZmDOX | 第48-50页 |
·玉米DOX 的序列分析 | 第50-57页 |
·讨论 | 第57-59页 |
·基因克隆的策略 | 第57页 |
·DOX 基因编码产物功能分析 | 第57-59页 |
第五章 总结论与创新 | 第59-60页 |
·总结论 | 第59页 |
·创新点 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
作者简介 | 第66页 |