| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 口蹄疫病毒 | 第13页 |
| 1.2 口蹄疫疫苗研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 树突状细胞靶向疫苗研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.1 体外抗原负载DC疫苗 | 第15页 |
| 1.3.2 配体介导的DC靶向疫苗 | 第15-17页 |
| 1.3.3 抗体介导的DC靶向疫苗 | 第17-19页 |
| 1.3.4 纳米粒子介导的DC靶向疫苗 | 第19页 |
| 1.4 总结与展望 | 第19-21页 |
| 第二章 FMDV AF72株结构蛋白VP1在昆虫细胞中的表达鉴定 | 第21-32页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 目的基因的优化合成 | 第21页 |
| 2.2.2 初始引物的设计合成 | 第21-22页 |
| 2.2.3 构建重组表达质粒pFastBac? HTB-VP1 | 第22-24页 |
| 2.2.4 构建重组表达杆粒Bacmid-HTB-VP1 | 第24-25页 |
| 2.2.5 重组杆粒pFastBac? HTB-VP1-VP1转染Sf 9 昆虫细胞 | 第25页 |
| 2.2.6 重组杆状病毒的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.7 目的蛋白的表达鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3 试验结果 | 第27-31页 |
| 2.3.1 目的基因VP1的PCR扩增 | 第27页 |
| 2.3.2 重组质粒pFastBac? HTB-VP1的双酶切鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 重组杆状病毒质粒Bacmid-HTB-VP1的PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.3.4 重组杆状病毒质粒转染SF9昆虫细胞 | 第28-29页 |
| 2.3.5 重组蛋白的IFA检测 | 第29-30页 |
| 2.3.6 重组蛋白的Western blotting检测 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第31-32页 |
| 第三章 VP1在大肠杆菌中的表达与纯化及靶向抗原Le(x)-VP1的制备 | 第32-43页 |
| 3.1 试验材料 | 第32页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第32页 |
| 3.2 试验方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| 3.2.2 VP1的亚克隆 | 第33-34页 |
| 3.2.3 重组克隆质粒pET28a-VP1的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.4 重组克隆质粒转化至表达菌E.coli BL21（DE3）感受态细胞 | 第35页 |
| 3.2.5 重组表达质粒的提取及PCR鉴定 | 第35页 |
| 3.2.6 目的蛋白的表达及表达形式的鉴定 | 第35页 |
| 3.2.7 目的蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.8 Sulfo-SMCC交联试剂活化VP1蛋白 | 第36页 |
| 3.2.9 Traut’s试剂活化链霉亲和素 | 第36页 |
| 3.2.10 SA-VP1蛋白交联物的制备 | 第36页 |
| 3.2.11 ELISA检测SA-VP1交联蛋白与生物素的特异性结合 | 第36-37页 |
| 3.2.12 Le(x)-VP1的制备 | 第37页 |
| 3.3 试验结果 | 第37-42页 |
| 3.3.1 VP1的亚克隆 | 第37页 |
| 3.3.2 重组克隆质粒pET28a-VP1的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.3 重组表达质粒的PCR鉴定 | 第38页 |
| 3.3.4 目的蛋白的表达鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.5 目的蛋白表达形式的鉴定 | 第39页 |
| 3.3.6 目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.7 活化VP1蛋白的SDS-PAGE | 第40页 |
| 3.3.8 SA-VP1蛋白交联物的SDS-PAGE检测 | 第40-41页 |
| 3.3.9 SA-VP1蛋白交联物的Western blotting检测 | 第41页 |
| 3.3.10 SA-VP1交联蛋白生物素特异性结合效应检测 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第42-43页 |
| 第四章 靶向抗原Le(x)-vp1的特异性免疫应答研究 | 第43-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.2 试验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 疫苗的制备 | 第43页 |
| 4.2.2 动物分组与免疫策略 | 第43-44页 |
| 4.2.3 小鼠采血 | 第44页 |
| 4.2.4 抗FMDV特异性抗体的检测 | 第44页 |
| 4.2.5 微量中和抗体检测 | 第44-45页 |
| 4.2.6 T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的检测 | 第45页 |
| 4.2.7 脾淋巴细胞增殖试验 | 第45-46页 |
| 4.2.8 细胞因子检测 | 第46页 |
| 4.3 试验结果 | 第46-50页 |
| 4.3.1 抗FMDV特异性抗体水平的检测结果 | 第46页 |
| 4.3.2 微量中和抗体的检测结果 | 第46-47页 |
| 4.3.3 T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的流式细胞术检测结果 | 第47-48页 |
| 4.3.4 脾淋巴细胞增殖试验结果分析 | 第48-49页 |
| 4.3.5 细胞因子的检测结果 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第50-52页 |
| 第五章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
