| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-24页 |
| 1.1 狂犬病概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 狂犬病 | 第14页 |
| 1.1.2 狂犬病流行病学 | 第14页 |
| 1.1.3 狂犬病临床症状与致病机理 | 第14-15页 |
| 1.1.4 狂犬病毒基因组结构及编码蛋白 | 第15-16页 |
| 1.1.5 狂犬病毒的生活周期 | 第16页 |
| 1.1.6 狂犬疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 犬细小病毒病概述 | 第17-19页 |
| 1.2.1 犬细小病毒病 | 第17页 |
| 1.2.2 犬细小病毒起源与演化 | 第17-18页 |
| 1.2.3 犬细小病毒病的临床症状与致病机理 | 第18页 |
| 1.2.4 犬细小病毒分类学和结构 | 第18-19页 |
| 1.2.5 犬细小病毒疫苗研究进展 | 第19页 |
| 1.3 负链RNA病毒的反向遗传操作和应用 | 第19-23页 |
| 1.3.1 负链RNA病毒的反向遗传操作 | 第19-21页 |
| 1.3.2 负链RNA病毒拯救过程的优化 | 第21页 |
| 1.3.3 反向遗传技术在狂犬病毒中的应用 | 第21-23页 |
| 1.4 目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 犬细小病毒VP2基因克隆分析及原核表达 | 第24-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 2.1.1 病料 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 引物的设计与合成 | 第25页 |
| 2.1.4 VP2基因的克隆与测序 | 第25-26页 |
| 2.1.5 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第26页 |
| 2.1.6 VP2蛋白的原核表达及Western Blotting鉴定 | 第26页 |
| 2.1.7 VP2蛋白切胶免疫豚鼠及豚鼠血清的免疫学鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.2.1 VP2基因的扩增以及序列分析 | 第27-28页 |
| 2.2.2 VP2基因的系统进化树分析 | 第28-29页 |
| 2.2.3 目的蛋白表达载体构建及鉴定结果 | 第29-30页 |
| 2.2.4 VP2蛋白的表达和Western Blotting检测 | 第30-31页 |
| 2.2.5 多克隆抗体的制备及免疫原性分析 | 第31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 重组病毒RBNSP-CPV-VP2的拯救及生物学特性研究 | 第33-40页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 3.1.1 质粒、细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 引物设计与合成 | 第34页 |
| 3.1.4 PCR扩增犬细小病毒VP2基因 | 第34页 |
| 3.1.5 表达VP2蛋白重组狂犬病毒基因组全长cDNA克隆的构建 | 第34页 |
| 3.1.6 重组病毒的拯救 | 第34-35页 |
| 3.1.7 免疫荧光鉴定重组病毒 | 第35页 |
| 3.1.8 重组病毒的传代和毒价测定 | 第35页 |
| 3.1.9 Western Blotting鉴定外源蛋白表达 | 第35页 |
| 3.1.10 外源基因稳定性检测 | 第35-36页 |
| 3.2 结果 | 第36-39页 |
| 3.2.1 犬细小病毒VP2基因的扩增结果 | 第36页 |
| 3.2.2 重组质粒双酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| 3.2.3 免疫荧光鉴定重组病毒结果 | 第37页 |
| 3.2.4 rBNSP-CPV-VP2毒价测定结果 | 第37-38页 |
| 3.2.5 Western Blotting鉴定外源蛋白的表达结果 | 第38页 |
| 3.2.6 外源基因稳定性检测结果 | 第38-39页 |
| 3.3 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 重组病毒对小鼠的免疫效果评价 | 第40-49页 |
| 4.1 材料与方法 | 第40-43页 |
| 4.1.1 实验动物、病毒 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 重组病毒对小鼠的毒力试验 | 第40-41页 |
| 4.1.4 疫苗的制备与免疫 | 第41页 |
| 4.1.5 狂犬病毒IgG抗体检测 | 第41页 |
| 4.1.6 RFFIT检测狂犬病毒中和抗体 | 第41-42页 |
| 4.1.7 间接ELISA方法检测VP2抗体 | 第42页 |
| 4.1.8 ELISPOT检测细胞因子IL-4 和IFN-Γ | 第42-43页 |
| 4.1.9 攻毒保护试验 | 第43页 |
| 4.1.10 数据分析 | 第43页 |
| 4.2 结果 | 第43-47页 |
| 4.2.1 重组病毒对小鼠的毒力检测结果 | 第43页 |
| 4.2.2 狂犬病毒IgG抗体检测结果 | 第43-44页 |
| 4.2.3 狂犬病毒中和抗体检测结果 | 第44-45页 |
| 4.2.4 犬细小病毒抗体检测结果 | 第45-46页 |
| 4.2.5 IL-4 和IFN-Γ 检测结果 | 第46-47页 |
| 4.2.6 小鼠攻毒保护试验结果 | 第47页 |
| 4.3 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
