| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一部分 | 第16-57页 |
| 第一章 引言 | 第16-25页 |
| ·绪论 | 第16-17页 |
| ·流感病毒概述 | 第17-19页 |
| ·流感病毒的生物学特征 | 第19-20页 |
| ·禽流感病毒致病的分子基础 | 第20-21页 |
| ·禽流感病毒的复制、感染及致病机理 | 第21-22页 |
| ·复制机理 | 第21-22页 |
| ·感染机制 | 第22页 |
| ·致病机制 | 第22页 |
| ·禽流感病毒分子进化机制 | 第22-24页 |
| ·抗原漂移 | 第22-23页 |
| ·基因重配 | 第23页 |
| ·禽流感与人流感病毒 | 第23-24页 |
| ·我国及全球H5N1亚型禽流感病毒 | 第24-25页 |
| 第二章 两株H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白细胞融合活性的比较研究 | 第25-36页 |
| ·材料与方法 | 第25-29页 |
| ·病毒与实验动物 | 第25页 |
| ·细胞和血清 | 第25页 |
| ·质粒载体 | 第25页 |
| ·试剂和仪器 | 第25-26页 |
| ·表达QH和SX株流感病毒HA基因真核表达质粒的构建 | 第26页 |
| ·表达裂解位点突变的QH和SX HA基因真核表达质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·QH和SX株野生型及裂解位点突变株HA对不同种类细胞融合活性 | 第27-28页 |
| ·胰酶依赖性细胞融合活性实验 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-32页 |
| ·QH和SX裂解位点突变HA基因真核表达质粒的构建 | 第29页 |
| ·Western Blot检测HA及HA裂解位点突变蛋白的表达 | 第29-30页 |
| ·QH和SX分离株HA基因对细胞的融合活性结果 | 第30页 |
| ·QH和SX HA基因裂解位点突变株对不同种类细胞的融合活性 | 第30-31页 |
| ·细胞融合胰酶依赖性实验检测 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-36页 |
| ·HA基因的序列及进化分析 | 第32-33页 |
| ·HA裂解位点的作用 | 第33-34页 |
| ·HA对细胞融合活性的影响 | 第34页 |
| ·胰酶对细胞融合活性的影响 | 第34-36页 |
| 第三章 QH及SXHA 90位点氨基酸突变对其细胞融合胰酶依赖性的影响 | 第36-45页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·表达QH/SX嵌合HA基因真核表达质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·QH和SXHA蛋白90位点氨基酸S-P突变真核表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·Western Blot检测HA的表达 | 第38页 |
| ·QH和SX HA 90SP诱导的细胞融合 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·表达嵌合HA及点突变HA基因真核表达载体的构建 | 第39页 |
| ·Western Blot检测蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·突变HA细胞融合活性的检测 | 第40-43页 |
| ·胰酶依赖性细胞融合结果 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 H5N1亚型禽流感病毒HA基因突变对其致病力和复制能力的影响 | 第45-57页 |
| ·材料与方法 | 第45-47页 |
| ·重组病毒与试验动物 | 第45-46页 |
| ·用于流感病毒拯救的重组pBD质粒载体的构建 | 第46页 |
| ·病毒拯救与鉴定 | 第46-47页 |
| ·救获病毒鸡胚半数感染量(EID_(50))的测定 | 第47页 |
| ·救获的重组病毒与野生病毒对Balb/c小鼠的致病力 | 第47页 |
| ·重组病毒在禽和哺乳动物体外培养细胞中的复制能力 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-55页 |
| ·重组病毒的拯救及鉴定 | 第47-48页 |
| ·救获病毒鸡胚半数感染量(EID_(50))的测定结果 | 第48页 |
| ·点突变病毒对小鼠的致病力的影响 | 第48-49页 |
| ·点突变病毒在禽和哺乳动物细胞内的复制结果 | 第49-51页 |
| ·外源性胰酶对病毒复制的影响 | 第51-53页 |
| ·传代病毒在细胞上的间接免疫荧光实验结果 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第二部分 尼帕脑炎重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及免疫原性评估 | 第57-73页 |
| ·前言 | 第57-58页 |
| ·材料和方法 | 第58-59页 |
| ·病毒和细胞 | 第58页 |
| ·质粒构建和病毒拯救 | 第58页 |
| ·免疫荧光检测重G和F蛋白的表达 | 第58-59页 |
| ·重组病毒致病性分析 | 第59页 |
| ·rLa-NiVG和rLa-NiVF在小鼠和猪上的免疫原性评估 | 第59-62页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第59-60页 |
| ·猪免疫试验 | 第60页 |
| ·重组病毒诱导体液和细胞免疫水平测定 | 第60-62页 |
| ·ELISA抗体的测定 | 第60页 |
| ·中和抗体水平测定 | 第60-61页 |
| ·rLa-NiVF诱导的小鼠产生的CD8+ T细胞反应测定 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-71页 |
| ·病毒拯救和鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组病毒的在鸡胚中的生长特性 | 第63-64页 |
| ·重组病毒能够表达正常生物学活性的NiV G和F蛋白 | 第64-66页 |
| ·NiV G和F蛋白的表达未增强NDV重组病毒在鸡和小鼠中的致病力 | 第66-67页 |
| ·rLa-NiVF能够诱导小鼠产生高水平的NiV F蛋白特异性CD8+ T细胞反应 | 第67-69页 |
| ·rLa-NiVG和rLa-NiVF能够诱导猪产生显著而持久的NiV中和抗体 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 全文结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 附录 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 作者简历 | 第89页 |
