| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1 乳腺癌合并肺癌研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1 复合癌概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 复合癌定义 | 第15页 |
| 1.1.2 复合癌的发病率和时间 | 第15-16页 |
| 1.1.3 复合癌的发病原因 | 第16-17页 |
| 1.1.4 复合癌对生存期的影响 | 第17页 |
| 1.2 乳腺癌合并肺癌的诊断与治疗 | 第17-19页 |
| 1.2.1 乳腺癌合并肺癌的临床表现及诊断 | 第17-18页 |
| 1.2.2 乳腺合并肺癌的治疗与预后 | 第18-19页 |
| 2 LncRNA研究进展 | 第19-22页 |
| 2.1 lncRNA定义及分类 | 第19页 |
| 2.2 lncRNA的作用机制 | 第19-20页 |
| 2.3 lncRNA在乳腺癌中的研究进展 | 第20-21页 |
| 2.4 lncRNA在肺癌中的研究进展 | 第21页 |
| 2.5 lncRNA与miRNA的相互作用关系 | 第21-22页 |
| 3 TCGA数据库探索非编码RNA与临床数据关系 | 第22-23页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第23-26页 |
| 1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 研究主要内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程图 | 第24-26页 |
| 第三章 乳腺合并肺癌中长非编码RNA的表达及鉴定 | 第26-47页 |
| 1 材料 | 第26-29页 |
| 1.1 乳腺合并肺癌组织各样本及单纯原发性乳腺癌和肺癌组织样本的收集及病理信息整理 | 第26-27页 |
| 1.2 实验仪器 | 第27页 |
| 1.3 实验试剂 | 第27-29页 |
| 2 方法 | 第29-38页 |
| 2.1 乳腺癌合并肺癌患者各组织及单纯原发性乳腺癌及单纯原发性肺癌石蜡样本组织总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2 总RNA的定量和质量检测 | 第30页 |
| 2.3 乳腺癌和肺癌中差异表达的lncRNA的筛选 | 第30-33页 |
| 2.3.1 TCGA数据库筛选乳腺癌和肺癌中差异表达的lncRNA | 第30-31页 |
| 2.3.2 LncRNA profier | 第31-32页 |
| 2.3.3 乳腺癌合并肺癌患者各组织lncRNA profiling结果分析 | 第32-33页 |
| 2.4 lncRNA表达检测和分析 | 第33-36页 |
| 2.4.1 特异性引物的设计 | 第33-35页 |
| 2.4.2 cDNA第一条链的合成 | 第35页 |
| 2.4.3 目标lncRNA Real-time PCR | 第35-36页 |
| 2.4.4 数据的处理及分析 | 第36页 |
| 2.5 lncRNA与乳腺癌及肺癌相关蛋白相互作用的预测 | 第36-38页 |
| 2.5.1 lncRNA与乳腺癌相关蛋白相互作用的预测 | 第36-37页 |
| 2.5.2 lncRNA与肺癌相关蛋白相互作用的预测 | 第37-38页 |
| 3 结果和分析 | 第38-47页 |
| 3.1 复合癌患者及单纯原发乳腺癌和肺癌患者RNA提取及质量分析 | 第38-39页 |
| 3.2 乳腺癌和肺癌中差异表达的lncRNA筛选结果 | 第39-40页 |
| 3.2.1 TCGA数据库筛选结果 | 第39页 |
| 3.2.2 LncRNA芯片分析结果 | 第39-40页 |
| 3.3 筛选lncRNA在复合癌及单原发癌组织中的表达结果分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 RT-qPCR引物特异性分析 | 第40-41页 |
| 3.3.2 复合癌患者乳腺癌及肺癌中目标lncRNA的表达结果分析 | 第41-42页 |
| 3.3.3 目标lncRNA在单纯原发乳腺癌及肺癌组织中的差异表达分析 | 第42-43页 |
| 3.4 乳腺癌中lncRNA表达在临床病理各指标上的差异性分析 | 第43-44页 |
| 3.5 乳腺癌合并肺癌中目标lncRNA在不同患病年龄组上的差异性分析 | 第44-45页 |
| 3.6 lncRNA与肿瘤相关蛋白相互作用预测结果分析 | 第45-46页 |
| 3.7 lncRNA差异表达与乳腺癌合并肺癌预后的关系 | 第46-47页 |
| 第四章 MALAT1在乳腺中的表达及调控作用网络的构建 | 第47-69页 |
| 1 材料与方法 | 第47-50页 |
| 1.1 实验材料 | 第47页 |
| 1.2 实验仪器（省略第三章出现的仪器） | 第47页 |
| 1.3 实验主要试剂 | 第47-50页 |
| 2 方法 | 第50-56页 |
| 2.1 lncRNA-miRNA-mRNA表达调控网络的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 2.1.1 lncRNA筛选与确定 | 第50页 |
| 2.1.2 预测lncRNA相互作用的miRNA | 第50页 |
| 2.1.3 预测miRNA相互作用的靶基因 | 第50页 |
| 2.1.4 构建lncRNA-miRNA-mRNA调控网络 | 第50-51页 |
| 2.1.5 Gene ontology (GO)分析 | 第51页 |
| 2.2 重组质粒构建 | 第51-54页 |
| 2.2.1 乳腺癌细胞MCF7细胞培养 | 第51-52页 |
| 2.2.2 乳腺癌细胞MCF7中总RNA提取 | 第52页 |
| 2.2.3 PCR扩增目的产物 | 第52-54页 |
| 2.2.4 重组载体的构建 | 第54页 |
| 2.3 双荧光素酶报告法验证lncRNA-miRNA-mRNA相互作用 | 第54-55页 |
| 2.3.1 接种贴壁细胞MCF7 | 第54页 |
| 2.3.2 细胞共转染 | 第54-55页 |
| 2.3.3 双荧光素酶表达活性分析 | 第55页 |
| 2.4 lncRNA-miRNA-mRNA调控途径对mRNA表达水平的影响 | 第55-56页 |
| 2.4.1 细胞转染 | 第55页 |
| 2.4.2 RT-qPCR检测细胞转染后mRNA表达水平 | 第55-56页 |
| 3 结果和分析 | 第56-69页 |
| 3.1 乳腺癌中lncRNA-miRNA-mRNA的相互作用网络分析 | 第56-59页 |
| 3.1.1 乳腺癌中lncRNA与miRNA的相互作用 | 第56-57页 |
| 3.1.2 miRNA的靶基因预测结果 | 第57-58页 |
| 3.1.3 基因本体论富集分析结果 | 第58-59页 |
| 3.2 LncRNA-mi RNA-m RNA相互作用关系的验证 | 第59-66页 |
| 3.2.1 MALAT1与mi R3395p相互作用的验证分析 | 第59-64页 |
| 3.2.2 miR3395p与BLCAP相互作用的验证 | 第64-66页 |
| 3.3 MALAT1与mi R3395p在转录水平对BLCAP表达量的影响 | 第66-69页 |
| 第五章 讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 总结和展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 附录 重要试剂的配制方法 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
