| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略表 Abbreviations | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1.1 鸡传染性支气管炎概述 | 第15-17页 |
| 1.2 鸡传染性支气管炎抗体的检测技术 | 第17-21页 |
| 1.2.1 对流免疫电泳(CIE) | 第18页 |
| 1.2.2 琼脂扩散沉淀试验(AGP) | 第18页 |
| 1.2.3 间接血凝抑制试验(PHA) | 第18-19页 |
| 1.2.4 免疫荧光抗体技术(IFA) | 第19页 |
| 1.2.5 病毒中和试验(VNT) | 第19页 |
| 1.2.6 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第19-21页 |
| 1.3 环介导等温扩增技术(LAMP) | 第21-23页 |
| 1.4 本课题的研究目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 利用IBV重组N蛋白建立间接N-ELISA抗体检测试剂盒的研究 | 第25-42页 |
| 2.1 材料和操作步骤 | 第26-28页 |
| 2.1.1 材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂的配制方法 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器设备及耗材 | 第27页 |
| 2.1.4 操作步骤 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 批内重复性试验 | 第28页 |
| 2.2.2 批间重复性试验 | 第28页 |
| 2.2.3 37℃加速老化试验 | 第28页 |
| 2.2.4 符合性试验 | 第28页 |
| 2.2.5 4℃和-20℃恒温保存试验 | 第28页 |
| 2.2.6 阻断试验 | 第28-29页 |
| 2.2.7 间接ELISA试剂盒的阴阳性判断标准的建立 | 第29页 |
| 2.2.8 临床样品血清的检测 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-38页 |
| 2.3.1 批内重复性试验检测结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 批间重复性试验检测结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 37℃加速试验老化结果 | 第31-32页 |
| 2.3.4 符合性试验结果 | 第32页 |
| 2.3.5 保存期试验结果 | 第32-36页 |
| 2.3.6 阻断试验结果 | 第36页 |
| 2.3.7 间接ELISA试剂盒阴阳性临界值的确定 | 第36页 |
| 2.3.8 临床血清样品的检测结果 | 第36-38页 |
| 2.3.8.1 IBV广西地方分离毒株制备的单价油苗免疫后的血清检测结果 | 第36-37页 |
| 2.3.8.2 养殖公司送检血清样品检测结果 | 第37-38页 |
| 2.3.9 间接N-ELISA试剂盒和IDEXX试剂盒敏感性比较结果 | 第38页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第38-40页 |
| 2.5 试剂盒使用说明 | 第40-42页 |
| 第三章 反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测IBV方法的建立 | 第42-56页 |
| 3.1 材料和方法 | 第43-44页 |
| 3.1.1 毒株 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 3.1.3 引物的设计与合成 | 第43-44页 |
| 3.2 LAMP检测方法条件的优化 | 第44-46页 |
| 3.2.0 引物的验证 | 第44页 |
| 3.2.1 反应温度的优化 | 第44页 |
| 3.2.2 反应时间的优化 | 第44页 |
| 3.2.3 甜菜碱浓度的优化 | 第44-45页 |
| 3.2.4 硫酸镁浓度的优化 | 第45页 |
| 3.2.5 dNTP浓度的优化 | 第45页 |
| 3.2.6 两对引物的优化比例 | 第45页 |
| 3.2.7 特异性实验 | 第45页 |
| 3.2.8 敏感性试验 | 第45-46页 |
| 3.2.9 重复性和稳定性检测 | 第46页 |
| 3.2.9.1 批内重复性试验 | 第46页 |
| 3.2.9.2 批间重复性试验 | 第46页 |
| 3.2.10 阴阳性的可视化 | 第46页 |
| 3.2.11 临床样品的检测 | 第46页 |
| 3.2.12 反应最终优化体系成份终浓度表 | 第46页 |
| 3.3 结果 | 第46-54页 |
| 3.3.1 引物的验证 | 第46-47页 |
| 3.3.2 反应温度的优化 | 第47-48页 |
| 3.3.3 反应时间的优化 | 第48页 |
| 3.3.4 甜菜碱浓度的优化 | 第48-49页 |
| 3.3.5 硫酸镁浓度的优化 | 第49页 |
| 3.3.6 dNTP浓度的优化 | 第49-50页 |
| 3.3.7 两对引物比例优化 | 第50页 |
| 3.3.8 特异性试验 | 第50-51页 |
| 3.3.9 敏感性试验 | 第51-52页 |
| 3.3.10 重复性和稳定性检测 | 第52页 |
| 3.3.11 阴阳性的可视化结果 | 第52页 |
| 3.3.12 临床样品检测结果 | 第52-53页 |
| 3.3.13 反应最终优化体系终浓度 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表论文情况及参与的科研项目 | 第62页 |
