| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第一章: 卵清蛋白启动子与家禽输卵管生物反应器的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1 卵清蛋白基因结构 | 第13-16页 |
| 1.2 卵清蛋白的作用及应用 | 第16页 |
| 1.3 真核启动子结构特点 | 第16-18页 |
| 1.4 卵清蛋白上游启动子元件 | 第18页 |
| 1.5 CpG岛结构特征及作用 | 第18-19页 |
| 1.6 DNA甲基化与去甲基化 | 第19页 |
| 1.7 卵清蛋白基因在染色质水平上结构 | 第19-20页 |
| 1.8 启动子预测 | 第20页 |
| 1.9 转基因家禽输卵管生物反应器 | 第20-22页 |
| 第二章: 鸡卵清蛋白启动子克隆与活性分析 | 第22-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第24页 |
| 2.2 六个卵清蛋白启动子克隆 | 第24-30页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2 输卵管基因组DNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 PCR扩增六个卵雜白启动子 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PCR产物胶回收 | 第27-28页 |
| 2.2.5 TA克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.5.1 连接克隆载体pMD18-T | 第28页 |
| 2.2.5.2 连接产物转化 | 第28-29页 |
| 2.2.5.3 质粒提取 | 第29页 |
| 2.2.5.4 质粒酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3 构建重组pGL3表达载体 | 第30-33页 |
| 2.3.1 重组克隆载体和pGL3-Basic双酶切 | 第30-32页 |
| 2.3.2 连接 | 第32页 |
| 2.3.3 连接产物转化 | 第32页 |
| 2.3.4 重组pGL3载体质粒提取和双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 重组pGL3-OVP 944/1548/1667/1999/2556/3606与pRL-TK共转染293FT细胞 | 第33-36页 |
| 2.4.1 去内毒素重组pGL3-OVP944/1548/1667/1999/2556/3606质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.4.2 质粒浓度测定 | 第34页 |
| 2.4.3 重组pGL3-OVP 944/1548/1667/1999/2556/3606与pRL-TK共转染293FT细胞 | 第34-35页 |
| 2.4.3.1 293 FT细胞复苏与培养 | 第34页 |
| 2.4.3.2 利用Roche公司FuGENE-HD转染试剂,质粒pGL3-OVP质粒和pRL-TK共转染293FT细胞 | 第34-35页 |
| 2.4.4 双荧光素酶检测 | 第35-36页 |
| 2.5 实验结果 | 第36-43页 |
| 2.5.1 启动子预测 | 第36-37页 |
| 2.5.2 六个OVA截短体 | 第37-38页 |
| 2.5.3 OVA启动子PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.5.4 序列分析 | 第39页 |
| 2.5.5 重组pGL3-OVP表达载体酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 2.5.6 去内毒素重组pGL3-OVP质粒浓度及纯度测定 | 第40-41页 |
| 2.5.7 双荧光素酶活性分析 | 第41-43页 |
| 2.6 讨论 | 第43-44页 |
| 2.7 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 慢病毒包装 | 第45-61页 |
| 3.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.1.1 主要实验试剂 | 第45页 |
| 3.1.2 主要溶液配制 | 第45-46页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第46页 |
| 3.2 启动子OVA 1548/1999/3606克隆 | 第46-51页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第46-47页 |
| 3.2.2 PCR扩增OVA 1548/1999/3606 | 第47页 |
| 3.2.3 PCR产物胶回收 | 第47页 |
| 3.2.4 构建克隆载体pENTR 5'-TOPO-OVP 1548、pENTR 5'-TOPO -OVP 1999和pENTR5 '-TOPO-OVP 3606。 | 第47页 |
| 3.2.5 构建重组慢病毒载体pLenti -OVP 1548-EGFP、pLenti-OVP 1999-EGFP、pLenti -OVP3606 -EGFP和pLenti -CMV EGFP。 | 第47-49页 |
| 3.2.6 转染293FT细胞 | 第49-50页 |
| 3.2.7 感染293 FT细胞 | 第50-51页 |
| 3.2.8 感染鸡输卵管上皮细胞 | 第51页 |
| 3.3 实验结果 | 第51-56页 |
| 3.3.1 构建重组pENTR5'-TOPO-OVA和pENTR D-TOPO-EGFP克隆载体 | 第51-52页 |
| 3.3.2 构建重组慢病毒载体 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组慢病毒载体转染293FT细胞 | 第53-54页 |
| 3.3.4 感染293 FT细胞 | 第54-55页 |
| 3.3.5 感染鸡输卵管上皮细胞 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第72页 |
