| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 漆酶的理化性质与特征 | 第10-14页 |
| 1.2.1 漆酶的分子特性 | 第10页 |
| 1.2.2 漆酶的结构特征 | 第10-11页 |
| 1.2.3 漆酶的化学特征 | 第11-12页 |
| 1.2.4 漆酶的催化氧化特征 | 第12页 |
| 1.2.5 漆酶的作用底物 | 第12-13页 |
| 1.2.6 漆酶活性的测定方法 | 第13-14页 |
| 1.3 漆酶的分布情况 | 第14-15页 |
| 1.3.1 漆酶在植物中的分布 | 第14页 |
| 1.3.2 漆酶在动物中的分布 | 第14页 |
| 1.3.3 漆酶在真菌中的分布 | 第14页 |
| 1.3.4 漆酶在细菌中的分布 | 第14-15页 |
| 1.4 漆酶基因异源表达及蛋白纯化 | 第15-18页 |
| 1.4.1 漆酶基因异源表达 | 第15-16页 |
| 1.4.2 漆酶蛋白的纯化 | 第16-18页 |
| 1.5 漆酶的酶学性质研究 | 第18-19页 |
| 1.5.1 漆酶的最适反应pH | 第18页 |
| 1.5.2 漆酶的最适反应温度 | 第18-19页 |
| 1.5.3 漆酶的最适反应底物 | 第19页 |
| 1.5.4 金属离子对酶活的影响 | 第19页 |
| 1.6 漆酶的应用前景 | 第19-20页 |
| 1.7 本课题的来源及研究目的意义 | 第20-21页 |
| 1.7.1 课题来源 | 第20页 |
| 1.7.2 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 漆酶基因的载体构建及异源表达 | 第21-33页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验菌株及载体 | 第21页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 LS01漆酶基因克隆载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.2 LS01漆酶基因重组表达载体的构建 | 第24页 |
| 2.2.3 LS01漆酶基因重组表达载体的转化及PCR验证 | 第24-26页 |
| 2.2.4 LS01重组漆酶的异源表达 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组转化子的筛选 | 第27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-32页 |
| 2.3.1 LS01基因组DNA提取及PCR验证 | 第27-28页 |
| 2.3.2 PCR扩增产物与T载体连接 | 第28页 |
| 2.3.3 重组T-载体的PCR验证和酶切验证 | 第28-29页 |
| 2.3.4 重组表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.5 重组表达载体的转化 | 第30页 |
| 2.3.6 重组表达载体的PCR验证及双酶切验证 | 第30-31页 |
| 2.3.7 重组表达载体的线性化及纯化 | 第31页 |
| 2.3.8 重组转化子的筛选 | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-33页 |
| 3 重组漆酶蛋白的纯化及酶学性质研究 | 第33-52页 |
| 3.1 材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 菌种 | 第33页 |
| 3.1.2 主要药品和试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 培养基 | 第34页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 漆酶异源表达产物的获得 | 第35页 |
| 3.2.2 漆酶异源表达产物的纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.3 纯化漆酶蛋白的电泳检测 | 第36-37页 |
| 3.2.4 漆酶酶活测定及蛋白曲线绘制 | 第37-38页 |
| 3.2.5 重组漆酶酵母菌的生长曲线 | 第38页 |
| 3.2.6 pH对重组漆酶活性的影响 | 第38页 |
| 3.2.7 温度对重组漆酶活性的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.8 金属离子对重组漆酶活性的影响 | 第39页 |
| 3.2.9 抑制剂重组漆酶活性的影响 | 第39页 |
| 3.2.10 有机溶剂对重组漆酶活性的影响 | 第39页 |
| 3.2.11 NaCl对重组漆酶活性的影响 | 第39页 |
| 3.2.12 重组漆酶对染料脱色的作用 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-51页 |
| 3.3.1 DEAE离子交换色谱分析 | 第40页 |
| 3.3.2 Sephadex G75凝胶过滤色谱分析 | 第40-41页 |
| 3.3.3 纯化漆酶蛋白的电泳检测 | 第41-42页 |
| 3.3.4 重组酵母菌的生长曲线 | 第42-44页 |
| 3.3.5 pH对漆酶的影响 | 第44-46页 |
| 3.3.6 温度对漆酶的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.7 金属离子对漆酶的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.8 抑制剂对漆酶的影响 | 第48页 |
| 3.3.9 有机溶剂对漆酶的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.10 NaCl对漆酶的影响 | 第49页 |
| 3.3.11 重组漆酶对染料的影响 | 第49-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |